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肝细胞癌中抑制细胞凋亡相关基因的差异表达被引量：2: 2009年; 目的:研究肝癌细胞系的基因表达概况,筛选表达差异的抑制细胞凋亡相关基因,探索肝细胞癌发生发展机制及肝细胞癌治疗的新靶点。方法:通过基因芯片技术检测肝癌细胞系Bel-7402、Hep-3B与胎儿肝细胞的全基因组序列,筛选表达差异的抑制细胞凋亡相关基因,采用RT-PCR、免疫组化对部分差异表达基因进行了验证。结果:在检测的54614个探针组中,Bel-7402、Hep-3B两株肝癌细胞与胎儿肝脏细胞相比表达共同上调2倍及2倍以上的有1452个基因;表达下调2倍及2倍以上的有2054个基因。与抑制细胞凋亡相关表达上调的基因有12个,选取2个基因进行RT-PCR、免疫组化验证,结果与基因芯片结论基本一致。结论:肝细胞癌中有众多的抑制细胞凋亡基因表达增高,通过影响TNF通路、bcl-2蛋白等多种方式共同抑制细胞凋亡,促进肿瘤细胞增殖。对这些基因的研究有助于阐明肝细胞癌发生发展机制,为肝细胞癌的治疗提供新的靶点。; 张永臣叶伟文剑赵伟; 关键词：肝细胞癌基因芯片细胞凋亡 SODD SURVIVIN

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1: 2010年; 目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。; 张永臣文剑张亮赵磊; 关键词：HIV-1 原核表达单克隆抗体杂交瘤细胞

应用基因芯片技术研究肝癌组织特异性候选基因: 2009年; 目的筛选肝癌组织特异性癌症相关候选基因。方法应用基因芯片技术检测肝癌细胞系Bel7402-2、肾癌细胞系KETR、胃癌细胞系SGC基因及人胎肝细胞系L-02的全基因组序列,分析其基因表达差异。结果与肾癌细胞系KETR、胃癌细胞系SGC及人胎肝细胞系L-02相比,在检测的54614个探针组中,肝癌细胞系BEL7402-2表达共同上调2倍及2倍以上的有324个基因,表达下调2倍及2倍以上的有53个基因。涉及凋亡、细胞黏附、细胞增殖、信号通路等多种生物学过程。结论筛选出377个肝癌组织特异性及癌症特异性相关抗原,为进一步鉴定肝癌特异性诊断指标提供了侯选基因。; 郭银燕赵伟文剑; 关键词：肝癌候选基因细胞株

基因芯片技术分析肝癌细胞系Bel-7402、Hep-3B与胎儿肝细胞基因表达差异被引量：2: 2007年; 目的研究肝癌细胞系的基因表达概况,寻找在肝癌细胞系及胎儿肝细胞中差异表达基因。方法应用基因芯片技术检测肝癌细胞系Bel-7402、Hep-3B与胎儿肝细胞的全基因组序列,分析其基因表达差异。结果在检测的54614个探针组中,Bel-7402、Hep-3B2株肝癌细胞与胎儿肝脏细胞相比表达共同上调2倍及2倍以上的有1452个基因;表达下调2倍及2倍以上的有2054个基因。涉及凋亡、细胞黏附、细胞周期等多种生物学过程,钙离子信号通路、G蛋白信号通路等多种信号通路。结论肝癌的发生、发展是由数千个癌症相关基因异常表达,进而引起多种生物功能异常的综合过程,对这些表达异常基因的综合分析,可以为阐明肝癌的发生机制提供重要的线索。; 叶伟赵伟文剑张永臣陈志强; 关键词：肝癌基因芯片基因表达谱细胞株

一种肝癌特异性GGT的DSA亲和色谱检测方法: 2007年; 目的建立一种特异的检测血清中肝癌特异性γ-谷氨酰转移酶(HS-GGT)的亲和层析方法,并观察HS-GGT对原发性肝癌(PHC)的鉴别诊断价值。方法采集64例PHC、22例肝外肿瘤、68例良性肝病及21例正常对照者的血清,以神经胺酸酶(NMD)水解后直接用欧曼陀罗凝集素(DSA)亲和层析柱分离,首先用柱平衡液洗脱不结合组分,再用50mmol/L醋酸洗弱结合组分,最后用100mmol/L醋酸洗脱强结合组分,用连续监测法测定各组分中的GGT活性,并分析各组分GGT在PHC鉴别诊断中的价值。结果DSA强结合组分中的GGT为PHC患者所特有,以其在总GGT所占比例>2%为PHC诊断的Cutoff值,其诊断特异度为95.5%,灵敏度为85.8%,准确度为92.0%。结论该方法能较好地鉴别诊断PHC,较其他检测方法更为简便,且同样有着较高的诊断灵敏度和特异度。; 蒋淑莲王念跃文剑赵伟吴引伟; 关键词：Γ-谷氨酰转移酶肝细胞癌

基因芯片技术在筛选肝癌差异表达基因研究中的应用进展被引量：1: 2009年; 肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居各种恶性肿瘤前列,但是其发生的分子机制仍知之甚少。基因芯片技术自问世以来已广泛用于人类多种肿瘤基因表达谱等方面的研究。在肝癌研究中,它为肝癌相关基因的研究提供了一种全新的方法,为寻找肝癌相关基因、进一步筛选和研究肝癌基因芯片的差异表达基因、寻找和检测与肝癌发生、发展及预后相关的生物分子标记,进而阐明其发病分子机制和进行有效的预防提供了捷径。本文结合基因芯片技术在筛选肝癌差异表达基因研究中的应用作一综述。; 郭银燕赵伟文剑; 关键词：肝癌基因芯片技术肿瘤相关基因

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江苏省自然科学基金(BK2004013)