国家自然科学基金(39830330)
- 作品数：15 被引量：65H指数：6
- 相关作者：戚中田沈倍奋施明赵平张立新更多>>
- 相关机构：第二军医大学军事医学科学院解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 从随机9肽库中筛选HCV抗原表位被引量：1
- 2002年
- 目的 :用患者血清中抗HCV抗体从随机 9肽库中筛选HCV抗原表位。方法 :将病人血清用硫酸铵粗提后 ,用ProteinA亲和层析柱纯化和制备抗HCV多克隆抗体 ;以此为筛选配基 ,对噬菌体表面展示的随机 9肽库进行亲和筛选。结果 :三轮筛选的投入产出比逐轮升高至 5 0× 10 - 3 、假阳性率逐轮降低至 0 2 % ,提示具有良好的富集效果。从第三轮挑选出的 15个克隆进行结合试验 ,发现 7个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清反应 ;测序表明 6个克隆的外源肽含有核心序列SPVAXVLXT。用阳性噬菌体克隆检测 2 0例病人血清 ,有程度不等的阳性反应。结论 :用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中筛选得到了有一定功能的模拟表位。
- 柯屾戚中田温新宇施明赵平沈倍奋
- 关键词：噬菌体随机肽库抗原表位丙型肝炎病毒HCV
- 用抗HCV多抗从随机15肽库中筛选抗原表位被引量：5
- 2003年
- 目的:分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法: 制备Protein A亲和层析柱,从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体;并以此为筛选配基,对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选。结果:三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3,假阳性率逐轮降低至0.2％,提示具有良好的富集效果。对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验,发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应。测序表明,8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS。用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清,有程度不等的阳性反应。结论:用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中,筛选到有一定功能的模拟表位。
- 柯屾朱继萍温新宇施明贺永怀沈倍奋赵平姚志建
- 关键词：噬菌体随机肽库抗原表位丙型肝炎病毒
- 肿瘤MUC1/Y的克隆及其胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化和鉴定被引量：9
- 2001年
- 为获得MUC1 Y全长cDNA及其胞外段蛋白 ,以用于进一步的生物学功能及肿瘤生物学治疗的研究 .利用RT PCR从HeLa细胞中扩增MUC1 Y全长cDNA ;PCR扩增其胞外段 ,克隆到原核表达载体pGEX 2T ,转化DH5a菌 ,诱导表达 ;亲和层析纯化 ;凝血酶酶切、GST活性及N端蛋白测序鉴定 ;免疫家兔制备多克隆抗体 .所得MUC1 YcDNA的开放读框为 759bp ,登录于GenBank(AF12 552 5) .其信号肽编码序列缺失 9bp ,第 3 3 1位发生G A转换 ,造成缬氨酸突变为蛋氨酸 .表达获得约 4 0kD融合蛋白GST Yex ,占菌体总蛋白 2 5%～ 3 0 % ,其中 70 %～ 80 %为可溶性 ,经亲和层析一步纯化 ,纯度 >90 % ,GST比活性为 0 2 1U μg .凝血酶酶切后的N端蛋白序列测定表明与已知序列完全一致 ,抗血清ELISA效价为 1∶2 50 0 0 0 .结果表明 ,克隆到发生碱基缺失和突变的MUC1 Y全长cDNA ,获得MUC1 Y胞外段蛋白及其多抗 ,可进一步用于相关研究 .
- 张立新李春海孙丽亚
- 关键词：MUC1/Y克隆大肠杆菌粘蛋白
- HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建与筛选被引量：8
- 2001年
- 目的 探讨噬菌体随机肽展示技术在筛选和鉴定病毒抗原序列研究中的应用前景。方法 用噬菌粒展示载体pCANTAB5X ,构建HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库。用抗 HCV核心单独阳性的血清对该库进行 4轮筛选 ,获得多个阳性克隆 ,测定和分析 8个杂交阳性克隆的DNA序列。结果 构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,噬菌体滴度为 2× 10 12 TU/ml(转化单位 /ml)。所测定的 7个阳性序列中的 6个为HCV核心蛋白序列 ,这些序列均含有与免疫筛选结果相似的HCV核心抗原序列。另一个为大肠杆菌nrfa基因。结论 所建的噬菌体文库有足够大的库容和较好的随机性 ,可以从该文库中筛选出正确的HCVC抗原序列。噬菌体展示技术完全可应用于病毒蛋白抗原序列的筛选 ,并具有简便、快速。
- 潘卫戚中田吴晓兰贺祥陈秋莉潘欣
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白病毒抗原
- HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建与筛选
- 2001年
- 潘卫戚中田吴晓兰贺祥陈秋莉潘欣
- 关键词：噬菌体核心蛋白HCV肽库
- 用随机6肽库筛选HGVE2抗原表位被引量：11
- 2000年
- 利用抗 HGV E2区的 3株单克隆抗体 M6、M1 3、M30作为筛选配基 ,对随机 6肽库进行亲和筛选 . 3轮筛选的投入产出比逐轮升高至 3.5× 1 0 -3、假阳性率逐轮降低至 0 .4% ,提示具有良好的富集效果 .从第 3轮随机挑出 1 2个克隆进行功能鉴定 ,结果表明 8个克隆与 M6抗体有较强的特异性结合力并有较好的竞争抑制作用 ,测序发现它们的外源肽具有核心序列 :WA( W/Y) WXH,该序列与 HGV同源性低 ;用外源肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P6GC9做竞争抑制试验 ,约 3×1 0 10个噬菌体即可较好地抑制 M6单抗与 HGV抗原结合 .该多肽可能是 HGV E2区识别 M6单抗并具有一定功能的模拟表位 .
- 柯屾戚中田施明王建安姚志建沈倍奋
- 关键词：噬菌体随机肽库抗原表位HGV
- 利用噬菌体随机肽库技术分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的表位被引量：1
- 2002年
- 目的 :分析患者血清中抗HCV抗体的抗原表位。方法 :用ProteinA亲和层析柱从患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体 ;以此对噬菌体表面展示的随机 6肽库进行亲和筛选。结果 :经具有良好富集效果的三轮筛选后 ,从第三轮挑选出的 12个克隆进行结合试验 ,发现 8个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清反应 ;测序表明阳性克隆的外源肽具有一定的相似性。用阳性噬菌体克隆检测 2 0例患者血清 ,有程度不等的阳性反应。结论 :用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中筛选得到了有一定功能的模拟表位。
- 柯屾戚中田温新宇施明胡美茹沈倍奋
- 关键词：噬菌体随机肽库丙肝血清抗HCV抗体表位
- 噬菌体展示肽库在细胞信号转导研究中的应用被引量：5
- 2001年
- 马仲才吴晓兰戚中田
- 关键词：噬菌体展示肽库细胞信号转导信号蛋白
- 利用噬菌体随机15肽库确定SLE相关多肽的研究被引量：10
- 2001年
- 目的 利用噬菌体随机 15肽库确定SLE相关多肽。方法 从系统性红斑狼疮 (SLE)病人血清中纯化抗dsDNA多克隆抗体 ,以此为筛选配基 ,对噬菌体随机 15肽库进行亲和筛选。结果经 3轮筛选 ,每轮的投入 /产出比逐轮升高 ,提示筛选具有良好的富集效果。第 3轮筛选后选其中 18个克隆进行结合试验 ,结果显示有 6个仅与SLE病人血清反应而不与正常人血清反应 ,经DNA序列测定 ,发现其中 5个克隆序列相同 ,通过该序列推出插入的外源短肽序列 ,合成并纯化该肽段。用此肽段分别与 2 0例SLE病人及 2 0例正常人血清反应 ,结果差异有显著性。结论 该肽段可能是与SLE相关的抗原多肽。
- 施明柯屾陶永涛唐福林张奉春姚志建沈倍奋
- 关键词：噬菌体随机肽库系统性红斑狼疮发病机制
- 噬菌体表面展示肽库技术在病毒研究中的应用
- 2000年
- 噬菌体表面展示肽库技术是近年来发展起来的用丝状噬菌体展示外源肽的一项新技术,被广泛应用于分子识别的各个领域。本文就该技术在病毒受体、病毒抗原表位、病毒抗体以及病毒疫苗和病毒性疾病的诊断等方面的研究进展作一简要概述。
- 曹洁赵平
- 关键词：病毒
