国家自然科学基金(31100549)
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 相关作者：黄志伟房志家陈婷赵敏陈忠翔更多>>
- 相关机构：东华大学中国科学院华东理工大学更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- 酿酒酵母转化方法的新探索被引量：7
- 2012年
- 在现有电转化和聚乙二醇/醋酸锂(PEG/LiAc)诱导的化学转化的基础上,进一步研究和探索了酿酒酵母感受态细胞不同预处理及相应的转化条件对转化效率的影响。结果表明:处于对数生长早期(OD600=0.6)的酵母细胞的转化效果最佳;电转化中分别以120 mmol/L的DTT和300 mmol/L的LiAc预处理感受态酵母菌10 min,可以得到较高的转化效果;联合使用120 mmol/L DTT和300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到7.15×105cfu/μg,PEG/LiAc诱导的化学转化中使用300 mmol/L LiAc能大幅提升酵母转化效率,达到2.75×105cfu/μg,远高于文献报道的水平。同时证明了改进后的转化方法同样能够提高外源DNA同源重组转化效率。
- 房志家陈婷郝贺龙张兴群黄志伟
- 关键词：酿酒酵母电转化DTT
- 磷脂酸磷酸酶与中性脂肪代谢调控被引量：4
- 2013年
- 中性脂肪主要指三酰甘油(triacylglycerol,TAG),是动植物细胞贮脂的主要形式。TAG约占人体脂类的95%,它的合成与动员是能量平衡调节的主要环节,而这一调节的失衡是诱发肥胖,产生高血压、心脏病及皮下脂肪丢失等疾病的主要原因。油脂代谢受到油脂基因所编码的脂肪相关调节酶的直接调控,中性脂肪代谢过程有高度的真核系统保守性。磷脂酸磷酸酶(phosphatidate phosphatase,PAP)也称脂素,相关基因PAH1(酿酒酵母)、LPIN1、LPIN2、LPIN3(哺乳动物)是研究人员近年确定的一类中性脂肪代谢调控的关键基因。相关的研究为进一步了解脂肪代谢有关疾病提供了一个重要线索,并且可能为研发控制脂肪代谢的新药提供新靶点。就近年PAP的相关研究主要成果进行概述。
- 房志家陈婷赵敏黄志伟
- 关键词：脂肪代谢分子调控
- 两种价态铬(Ⅲ,Ⅵ)对真核酵母细胞谷胱甘肽水平影响
- 2020年
- 工业的迅猛发展使得重金属污染加剧,得到了人们的广泛关注。铬(Cr)在化工业中的广泛应用,使其成为一种主要的环境污染重金属离子。酿酒酵母是研究金属毒性最常用的生物之一。本文比较了三种铬盐(三氯化铬、三氧化铬、重铬酸钾)对酿酒酵母生长的影响,半抑制浓度的两种价态铬(Cr^3+,Cr^6+)处理酵母细胞,Cr^6+引起细胞的致死率更高。已有研究表明谷胱甘肽是胞内重要的还原剂,常用于细胞的重金属解毒,因此探究了两种价态的铬对酵母胞内谷胱甘肽水平的影响。结果显示重铬酸钾和三氧化铬浓度的升高都会引起胞内含量显著降低,而三氯化铬基本不变,过表达GSH1基因有利于提高酵母细胞对Cr^6+的抗性,但对Cr^3+没有明显效果,这说明两种价态铬在胞内生化作用方式不同,细胞应对的解毒机制也不一样。该研究对工业含铬废弃物处理和微生物治理环境污染提供了理论依据。
- 陈冉冉朱倩赵敏黄志伟
- 关键词：三价铬六价铬谷胱甘肽
- 极长链脂肪酸的合成缺陷对酵母细胞膜的稳定性和多烯类药物敏感性的影响被引量：3
- 2019年
- 【背景】脂肪酸延长酶家族参与脂肪酸代谢具有真核生物的高度保守性,且与膜脂的代谢密切相关。但细胞极长链脂肪酸(Very long-chain fatty acid,VLCFA)的合成缺陷对膜的稳定性及多烯类药物的敏感性影响并不完全明晰。【目的】探究细胞VLCFA延长酶ELO1、ELO2和ELO3的作用及功能。【方法】研究脂肪酸延长酶缺陷型elo1△、elo2△和elo3△对多烯类药物两性霉素B (Amphotericin B,AmB)、制霉菌素(Nystatin,Ny)及唑类硝酸益康唑(Econazolenitrate,Eco)的响应,检测不同酵母细胞的麦角固醇,检测其对Na^+的响应及胞内钠钾离子水平。【结果】发现细胞VLCFA延长酶ELO2和ELO3缺陷后对AmB高度敏感;VLCFA延长酶缺陷突变株elo2△和elo3△对其它多烯类药物Ny及唑类药物Eco也十分敏感;细胞膜不饱和脂肪酸增加也会改变膜的稳定性,实验结果表明外源油酸(Oleic acid,OLA)增加了elo2△和elo3△突变体的AmB敏感性;相对野生型BY4741和elo1△,缺陷菌株elo2△和elo3△中麦角固醇的含量有显著下降;钠钾离子平衡是维护细胞正常生理的必要条件,也是检测细胞膜稳定性的重要参数,发现VLCFA的合成缺陷菌株对高浓度的NaCl比野生型菌株更敏感,使用ICP-AES检测不同浓度AmB胁迫下细胞内钠钾离子水平,也显示VLCFA延长酶缺陷菌株中,钠水平表现出上升趋势,并且细胞内钾含量明显降低。【结论】细胞VLCFA的合成缺陷会导致细胞膜更脆弱、稳定性下降,从而提高真菌对多烯类药物的敏感性,也表明脂肪酸延长酶是潜在的抗真菌治疗靶点。
- 朱倩程迅杜秀秀周国英邓云霞黄志伟
- 关键词：麦角固醇酿酒酵母
- 人脂素基因LIPIN1在酵母中的异源表达及细胞功能分析被引量：1
- 2014年
- 脂类代谢调控是维持生物体能量平衡的重要环节,脂类代谢调控的紊乱与肥胖症、糖尿病和高血压等疾病密切相关。脂素基因LIPIN1是诱导脂肪细胞分化、调控脂类合成的关键基因,其编码的磷脂磷酸酶(phosphatidate phosphatase,PAP)在人体三酰甘油合成中起关键作用,是维持人体脂类平衡的重要保障。此外,该基因还作为重要的转录辅激活因子参与多种生长及营养代谢调控。多种生物中均有类似功能的基因被发现,暗示了其功能的多样性及物种间的保守性。该文利用酿酒酵母在脂类代谢研究中性状易于表征、同源基因PAH1功能明确的优势,通过同源重组技术构建脂素缺陷型酵母,探索脂素基因在维持酵母正常生长及脂类合成中的重要作用,并通过功能互补及生物信息学技术对比分析了人源LIPIN1基因与酵母PAH1基因编码蛋白在结构和功能上的保守性,为脂素基因LIPIN1的细胞功能研究提供基础数据。
- 房志家杜秀秀黄志伟王松史萍
- 关键词：酵母
- 黄连素对鸡球虫的防治效果研究被引量：3
- 2015年
- [目的]探讨黄连素对鸡球虫的防治效果。[方法]将2周龄的雏鸡分为攻虫对照组、空白对照组、加药A组、加药B组,分别给予0、0、300和1 500μg/g体重剂量的黄连素,探讨黄连素的安全性和及其对鸡球虫的治疗效果。[结果]加药A组、加药B组和攻虫对照组雏鸡的相对增重率分别为55.56%、10.71%、26.43%。空白对照组、加药A组、加药B组和攻虫对照组的抗球虫指数依次为200、141.26、59.99、29.29。[结论]黄连素对鸡球虫具有明显的治疗效果,剂量以300μg/g体重为宜。
- 刘伟伟房志家宋洋乔彧朱倩刘红梅黄志伟
- 关键词：球虫病黄连素
- 脂肪酸延长酶缺陷对酵母细胞脂质代谢及油酸胁迫响应的影响被引量：3
- 2018年
- 生物医学证据表明,过量的油脂特别是脂肪酸(fatty acids,FA)在非脂肪组织累积会引起脂代谢障碍,引起细胞功能紊乱或坏死。脂肪酸延长酶家族参与脂肪酸代谢,具有真核生物的高度保守性,且与膜脂的代谢密切相关。但脂肪酸延长酶与细胞脂毒效应的关系并不清楚。该文利用模式生物酿酒酵母在脂类代谢研究中性状易于表征、遗传操作便利的优势,通过对比脂肪酸延长酶缺陷型elo1Δ、elo2Δ和elo3Δ与野生型酵母(wild-type,WT)对不同脂肪酸胁迫的响应,发现极长链脂肪酸延长酶基因ELO2和ELO3缺陷后对油酸(oleic acid,OLA)高度敏感;细胞脂滴及中性脂质的代谢对维持细胞脂类平衡起关键作用。研究结果显示,长链脂肪酸的合成缺陷或油酸处理均促进细胞脂滴的形成,同时显著提高细胞中性油脂(TAG)和甾醇酯(SE)合成;采用气相色谱–质谱联用技术分析脂肪酸组成,结果显示,ELO3缺陷,C_(26)脂肪酸基本检测不到,而C_(20)与C_(22)脂肪酸会累积;ELO2缺失后,C_(26)脂肪酸的含量也明显降低。而油酸的处理会增加BY4741胞内总的极长链脂肪酸的比例;elo2Δ和elo3Δ的不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比例增大;相反,过表达脂肪酸延长酶基因,与野生型菌株相比能显著降低细胞油酸的含量。模式生物脂肪酸延长酶对细胞脂质代谢及油酸胁迫响应的研究,为医学脂代谢障碍及细胞脂毒效应研究提供了基础数据。
- 程迅杜秀秀王寒冬黄志伟邓云霞沈裕虎
- 关键词：脂代谢
- 一种简单高效的酵母单菌落PCR方法被引量：7
- 2013年
- 目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落PCR方法。方法:以Leu2MX6基因同源重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基因组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制备PCR模板进行重组克隆鉴定,并对6种PCR模板制备方法的效果进行比较与分析;对加热提取法进行优化并进行重组子的提取和验证。结果与结论:直接以1 mm2单克隆菌株95℃处理5 min后的酵母菌落水悬浮液为模板进行单菌落PCR,是一种简单高效的酵母重组克隆鉴定方法。该方法能弥补传统方法的不足,且简便快速、结果稳定,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段。同时,这种单菌落PCR法也可应用于重组毕赤酵母的阳性克隆筛选。
- 陈忠翔房志家陈婷赵敏黄志伟
- 关键词：酵母菌落PCR重组克隆
- 内源性的硫饥饿诱导mRNA错译和酵母细胞镉抗性
- 尽管有机体使用高度精确的分子进化过程和各种mRNA质量控制机制来转录其基因,并保持遗传信息的保真度。但是错译是所有生物系统中固有的一种生物现象,如环境因素诱导的低水平mRNA翻译错误。然而,特定条件下,真核生物中的这种误...
- 史萍张晓宇陈冉冉黄志伟
- 关键词：镉毒性
- 文献传递
- 四种药用植物提取物抑菌保鲜活性的研究被引量：6
- 2012年
- 应用滤纸片扩散法、微量稀释法等方法研究银杏叶、当归、党参(野生)、藏茵陈4种药用植物水和乙醇提取物抑菌效果以及在食品保鲜方面的应用。结果表明水提取物均无明显的抑菌活性;银杏叶、藏茵陈醇提取物对金黄色葡萄球菌有抑菌活性,对大肠杆菌、酿酒酵母无明显抑菌效果,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为450、160μg/mL。发现随着基质pH的改变,2种提取物的最低抑菌浓度随pH的增加而升高,但变化趋势较常用防腐剂山梨酸钾和苯甲酸弱,在pH5～8的范围,2种提取物的最低抑菌浓度均低于山梨酸钾。在模式食品中将提取物与山梨酸钾、苯甲酸进行联合添加具有协同增效抑菌活性,可降低化学防腐剂的用量,尤其是与苯甲酸联合添加,可在一周内完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。
- 陈丽凤陈婷房志家赵敏黄志伟
- 关键词：天然防腐剂抑菌效果最低抑菌浓度山梨酸钾
