四川省卫生厅科研基金(100208)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：罗波郑小莉刘佳佳谢晓东张艺更多>>
- 相关机构：泸州医学院泸州医学院附属口腔医院更多>>
- 发文基金：四川省卫生厅科研基金四川省教育厅科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 鼠Mincle蛋白B细胞抗原表位预测及多克隆抗体制备被引量：8
- 2011年
- 目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能性及表面抗原性指数;融合表达PET30a(+)/Mincle蛋白并通过镍层析柱纯化后,免疫兔获得Mincle多克隆抗体。结果 Mincel蛋白是一种跨膜蛋白质,N末端第1-22号氨基酸可能位于蛋白的表面并可能为抗原表位;成功构建了重组载体PET30a(+)/Mincle,转化大肠杆菌BL21后表达包涵体融合蛋白,利用镍亲和层析得到了无生物活性的高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫兔,制备了滴度达1:128 000的多克隆抗体;Western-blot检测显示抗体特异性高。结论 Mincle蛋白N端即胞外区的第1-22氨基酸可作为Mincle蛋白的主要抗原表位区以制备Mincle多克隆抗体。
- 郑小莉张艺谢晓东罗波刘佳佳
- 关键词：B细胞抗原表位多克隆抗体
- 冰冻切片法破碎大鼠心肌组织提取RNA的实验研究被引量：5
- 2012年
- 目的:通过比较液氮研磨法和冰冻切片法破碎大鼠心肌组织来提取RNA的效果,证明利用冰冻切片机破碎动物组织提取RNA是一种简便实用的方法。方法:用液氮研磨法和冰冻切片法破碎大鼠心肌组织并提取RNA,通过RNA浓度、纯度及完整性的检测,以及扩增β-actin基因来比较两种方法的效果。结果:液氮研磨法和冰冻切片法提取的RNA浓度分别为2.59μg/μl、2.05μg/μl。琼脂糖凝胶电泳检测可见两条明显的条带。28s rRNA与18s rRNA条带亮度之比大于1。β-actin基因的PCR扩增在约445bp处有与预期长度一致的明亮条带。结论:本实验结果显示,冰冻切片法破碎心肌组织能达到液氮研磨法的效果,是一种成本低,效果好,快速简便的破碎动物组织提取RNA的方法。
- 罗波郑小莉冯燕段素群毛樱逾
- 关键词：大鼠心肌组织RNA提取
- 鼠NF～IL～6反义真核表达载体的构建和鉴定
- 2011年
- 目的构建包含鼠细胞转录因子白介素6（NF～IL6）反义基因的部分功能区的重组反义真核表达载体pcDNA3.0/NF～IL6,为进一步研究鼠巨噬细胞中NF～IL6的功能奠定基础。方法 Trizol试剂法提取体外分离培养的鼠巨噬细胞总RNA,经逆转录聚合酶链式反应（RT～PCR）扩增NF～IL6基因目的片段,PCR产物及真核表达载体pcD-NA3.0分别双酶切并进行连接,转化入大肠杆菌Ecoli Dh5α扩增后获得重组载体。结果 RT～PCR获得预期大小的特异性NF～IL6 DNA片段,经PCR、双酶切及测序分析证实已将鼠NF～IL6 cDNA片段正确的反向插入真核表达载体中。结论成功获得反义pcDNA3.0/NF～IL6重组质粒。
- 郑小莉谢晓东罗波梅志强刘佳佳
- 关键词：反义核酸巨噬细胞
