山东省自然科学基金(Y2008C58)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抑制Notch-1基因表达的siRNA重组腺相关病毒载体的构建及滴度测定
- 2010年
- 目的:构建并制备携带靶向干扰Notch-1基因shRNA的重组腺相关病毒载体。方法:设计针对Notch-1的靶DNA序列,构建重组质粒pAAV-MCS2/siRNA-Notch-1,将该质粒和腺相关病毒包装质粒pAAV-RC,腺病毒辅助质粒pHelper共转染QBI-293A细胞,包装成带有Notch-1基因的重组腺相关病毒。结果:PCR鉴定分析结果表明成功构建针对Notch-1的siRNA重组腺相关病毒载体,滴定法测定重组病毒载体基因组得到滴度为1.2×1012VP/L的高滴度腺相关病毒。结论:成功构建携带Notch-1基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体,为探索Notch-1基因在胶质母细胞瘤肿瘤干细胞中的作用提供实验基础。
- 任松涛姚维成栗世方郭磊
- 关键词：小RNA重组腺相关病毒
- 下调Notch-1基因表达抑制胶质母细胞瘤的增殖活性研究被引量：1
- 2011年
- 目的 应用siRNA下调胶质母细胞瘤TJ-905细胞株Notch-1基因抑制肿瘤增殖活性.方法 实验设以Notch-1为基因靶点的siRNA1、siRNA2、siRNA3转染组、阴性对照组和空白对照组,采用OligofectamineTM2000二次转染方法将 siRNA转移到细胞内.实时荧光定量PCR检测siRNA对Notch-1基因表达的抑制作用,筛选出最优siRNA序列用于后续研究;四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖活性;使用Notch-1 siRNA或阴性siRNA转染的TJ-905细胞悬液注射裸鼠腋下,观察移植瘤生长情况,比较肿瘤体积,观察3周后处死动物,切片行HE染色鉴定.结果 （Ⅰ）siRNA明显抑制Notch-1 mRNA的表达水平,空白对照组、阴性对照组、siRNA1、2、3转染组Notch-1 mRNA 表达率分别为1.00±0.07、1.04±0.05、0.11±0.02、0.12±0.01、0.77±0.03,siRNA1为最优序列.（2）siRNA1转染组细胞增殖活性显著降低.（3）接种Notch-1 siRNA1转染的TJ-905细胞裸鼠肿瘤生长速度明显低于接种阴性转染的TJ-905细胞裸鼠,裸鼠处死后观察肿瘤体积：Notch-1 siRNA1转染组为（748.3±154.3）mm3,阴性转染组为（1739.2±249.7）mm3,病理切片HE染色证明为多形性胶质母细胞瘤.结论 化学合成的靶向Notch-1基因的siRNA可以显著地下调Notch-1基因表达水平,抑制肿瘤增殖活性.为进一步进行胶质瘤的基因治疗研究奠定基础.
- 王建鹏姚维成栗世方孙晓朋
- 关键词：神经胶质瘤小干扰RNA裸鼠
- 靶向Notch-1基因的siRNA对人脑胶质母细胞瘤细胞裸鼠体内成瘤性的影响被引量：1
- 2010年
- 背景与目的:近些年的研究发现,Notch-1基因在人脑胶质母细胞瘤的发生、发展中起到了重要的作用。本研究旨在观察靶向Notch-1基因的小干扰RNA(siRNA)对人脑胶质母细胞瘤裸鼠体内成瘤性的影响。方法:以OligofectamineTM为载体将靶向Notch-1基因的siRNA转染人脑胶质母细胞瘤细胞系TJ905中,并设立无意序列siRNA(nonsense siRNA)转染组。然后,把经Notch-1 siRNA和经无意序列siRNA转染的细胞及未经转染的细胞分为3组。每组细胞悬液注射裸鼠5只,注射量按1×107/mL无血清培养基注射入每只裸鼠皮下200μL,观察动物的成瘤情况,每隔3d记录一下裸鼠移植瘤的体积V=(ab2)/2(a为肿瘤的长径,b为肿瘤的宽径),并在接种成瘤后对各组动物进行相应的siRNA/OligofectamineTM混合物的瘤内注射治疗,对照组注射等量的PBS。观察20d后处死动物,取出肿瘤组织,常规石蜡包埋,组织切片HE染色并进行Notch-1的免疫组化染色测定。结果:裸鼠处死后观察肿瘤直径:Notch-1 siRNA转染组为(1203±206)mm3,siRNA转染组为(2241±401)mm3,对照组为(2309±466)mm3,Notch-1 siRNA转染组与无意siRNA转染组,以及Notch-1 siRNA转染组与对照组之间比较均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示:Notch-1的表达在Notch-1 siRNA转染组与其他两组之间的比较也同样具有统计学意义(P<0.01)。结论:靶向Notch-1基因的siRNA可以通过有效地降低肿瘤细胞Notch-1的表达来抑制裸鼠皮下胶质母细胞瘤移植瘤的生长,但还需要对siRNA的合理使用剂量与转染方式进行更加深入的研究。
- 孙晓朋姚维成栗世方王建鹏
- 关键词：NOTCH-1SIRNA胶质母细胞瘤裸鼠
