国家自然科学基金(30801003)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 流式细胞术鉴定人外周血滤泡辅助性T细胞被引量：5
- 2009年
- 目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)鉴定正常人外周血单个核细胞(PBMC)中滤泡辅助性T(Tfh)细胞,以便对其功能进行进一步研究。方法:密度梯度离心法分离人PBMC,采用不同荧光素标记的抗CXCR5、CD4及CD19抗体进行染色FCM分析,鉴定出表型为CD4+CXCR5+的T细胞亚群。结果:外周血可以检测到CD4+CXCR5+T细胞亚群,占CD4+T淋巴细胞百分比为(11.09±0.38)%,MFI值为25.78±0.72,低于B细胞膜表面CXCR表达水平(MFI值为99.6±8.1)。结论:健康人外周血存在一定比例的Tfh细胞,应用FCM可以成功鉴定Tfh细胞,为进一步研究其功能提供了良好的技术平台。
- 张春梅张赟张圆徐竹蔚杨琨杨安钢庄然金伯泉
- 关键词：流式细胞术TFHCXCR5
- CD226分子siRNA慢病毒载体的构建和鉴定
- 2010年
- 为设计筛选针对人CD226分子的siRNA序列,构建相应的siRNA慢病毒载体,检测其对Jurkat/E6细胞膜表面天然CD226分子表达水平的影响,首先设计并合成4对siRNA双链寡聚核苷酸,与CD226分子真核表达载体共同转染293T细胞,挑选出最有效抑制CD226表达的序列。应用基因工程技术,将该序列连接于慢病毒载体pLKO.1中,构建携带针对目的基因CD226的siRNA慢病毒载体。使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒载体共转染293T细胞,收集上清,感染Jurkat/E6细胞系,对病毒感染效果进行检测。结果在4条针对CD226分子设计的siRNA序列中,siRNA—513最为有效的抑制了外源性CD226分子的表达,带有该序列的慢病毒载体pLKO—CD226可以完全抑制Jurkat/E6细胞上天然分子的表达。说明应用基因工程技术成功构建了针对CD226分子的RNA干扰慢病毒载体,为深入研究人类黏附分子CD226在机体免疫功能方面提供了技术支持。
- 张圆方亮张春梅金伯泉庄然
- 关键词：CD226SIRNA慢病毒载体
