西安市科技计划项目(GG05168) 作品数:5 被引量:18 H指数:3 相关作者: 徐宏勇 徐立 李开宗 高建宏 窦科峰 更多>> 相关机构: 第四军医大学西京医院 解放军第451医院 中国人民解放军 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 西安市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
一种特异性靶向性淋巴细胞对荷瘤裸鼠的治疗观察 被引量:1 2018年 目的观察癌胚抗原(CEA)阳性靶向性淋巴细胞对胃癌细胞体内及体外靶向性治疗作用。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),通过脂质体lipofectamine 2000介导的细胞转染将重组真核表达载体anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0介导的细胞转染导入PBMC,以获取CEA阳性靶向性淋巴细胞(以下简称靶淋巴细胞);将不含anti-CEA-sc Fv-CD3ζ-pc DNA3.0融合基因片段的pc DNA3.0真核表达载体转染入PBMC,获取的淋巴细胞简称为空载体淋巴细胞。将上述两种淋巴细胞分别与CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞和CEA阴性BGC-823胃癌细胞共培养,观察不同靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养(24 h或36 h)后的识别情况或其对胃癌细胞凋亡的影响。并将上述已获取的两种淋巴细胞分别通过尾静脉注入荷CEA阳性KATOⅢ胃癌细胞裸鼠和荷CEA阴性BGC-823胃癌细胞裸鼠体内,以观察其对荷胃癌裸鼠肿瘤生长情况的影响。结果 (1)靶淋巴细胞与胃癌细胞共培养24 h时,靶淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别率为72.3%,淋巴细胞对KATOⅢ胃癌细胞的识别能力较强;其对BGC-823胃癌细胞识别率为7.8%,其对BGC-823胃癌细胞识别能力较弱。(2)当靶淋巴细胞、空载体淋巴细胞分别与KATOⅢ和BGC-823胃癌细胞分别共培养36 h时,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的凋亡率明显高于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(P=0.032),而靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组和空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组的凋亡率比较差异无统计学意义(P=0.118)。(3)在观察40 d内,靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于空载体淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组(F=5.010,P<0.01)和空白对照组(F=7.560,P<0.01);靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组与空载体淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组间比较差异无统计学意义(F=1.210,P>0.05)。靶淋巴细胞+KATOⅢ胃癌细胞组的肿瘤体积明显小于靶淋巴细胞+BGC-823胃癌细胞组(F=4.982,P<0.01)。结论 CEA� 徐宏勇 徐立关键词:癌胚抗原 裸鼠 淋巴细胞 TAG-72嵌合锚定T细胞对乳腺癌的抑癌效应观察 被引量:1 2012年 目的制备肿瘤相关糖蛋白-72抗原(TAG-72)嵌合锚定T细胞,通过体外实验检测其对乳腺癌细胞的抑癌活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),采用脂质体lipofectamineTM2000介导的细胞瞬时转染方法,将已制备的重组真核表达载体即抗TAG-72-scFv-CD3ζ-pcDNA 3.0导入PBMC,以获得TAG-72嵌合锚定T细胞,以此为转染组;用转染空载体pcDNA 3.0的PBMC作为对照组。将转染组嵌合锚定T细胞和对照组PBMC细胞分别与乳腺癌细胞系MCF-7及Bcap37共培养,观察两者对乳腺癌细胞G1期的阻滞率。结果转染组对MCF-7细胞系的G1期阻滞率为(82.3±6.9)%,对照组为(43.4±3.9)%,2组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);转染组对Bcap37细胞系的G1期阻滞率为(51.3±4.7)%,对照组为(45.6±2.5)%,2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TAG-72嵌合锚定T细胞可特异性地抑制TAG-72+乳腺癌细胞的增殖,此将为乳腺癌的临床诊治提供一种有希望的途径。 徐宏勇 丁蓉 徐立 李开宗关键词:乳腺癌 外周血单个核细胞 嵌合锚定T细胞致癌胚抗原阳性胃癌细胞的凋亡效应 被引量:11 2007年 目的探讨 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞的制备方法,并检测其活化功能及诱导 CEA阳性胃癌细胞的杀伤活性。方法分离外周血单个核细胞(PBMC),然后用免疫磁珠分离得到 CD^+_8T 细胞。将重组真核表达载体抗-CEA-scFv-CD3 zeta-pcDNA3.0采用脂质体转染上述 T 细胞以制备CEA 靶向性的嵌合锚定 T 细胞;用流式细胞仪检测其 CD69的表达,以检测嵌合锚定 T 细胞活化功能;将嵌合锚定 T 细胞与胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901共培养,检测后者膜联蛋白 V 的表达,分析嵌合锚定 T 细胞致胃癌细胞的凋亡效应。结果将已制备的 CEA 靶向性嵌合锚定 T 细胞培养12 h、24 h后,检测 T 细胞的活化信号 CD69表达率分别为40.5%±3.4%、48.3%±2.8%,证明嵌合锚定 T 细胞具备活化功能。检测与嵌合锚定 T 细胞共培养的胃癌细胞 HGC-27、SGC-7901,凋亡率分别为47.8%±4.2%、18.7%±2.8%,两者之间有统计学意义(P<0.05)。结论 CEA 靶向性嵌合锚定T细胞可特异性识别 CEA 阳性胃癌细胞并促使后者凋亡,这种治疗策略将为胃癌的临床诊治提供一种有希望的途径。 徐宏勇 徐立 高建宏 李开宗 窦科峰关键词:胃肿瘤 T淋巴细胞 癌胚抗原 抗肿瘤相关糖蛋白-72单抗在人乳腺癌中的表达 被引量:4 2006年 目的检测肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)在人乳腺癌细胞系的表达,为利用抗TAG-72单链抗体(singlechainvariablefragment,scFv)诊治乳腺癌提供实验依据。方法将人乳腺癌细胞系MCF-7和Bcap-37通过细胞培养至对数生长期,并固定于载玻片上。用原核表达的抗TAG-72scFv经免疫细胞化学方法检测TAG-72在乳腺癌细胞中的表达。结果TAG-72在乳腺癌细胞系MCF-7中表达为阳性,在Bcap-37中表达为阴性,表明TAG-72在部分人乳腺癌细胞中得以表达。结论TAG-72在人部分乳腺癌中阳性表达,表明TAG-72抗原可作为一个肿瘤标志物在临床中应用,也为抗TAG-72scFv在乳腺癌诊治中应用奠定了实验基础。 徐宏勇 徐立 李开宗 高建宏关键词:乳腺癌 单链抗体 肿瘤相关糖蛋白-72抗原在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义 被引量:6 2007年 目的探讨抗肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)抗原的表达及其与原发性胆囊癌(PGC)病理特征的关系。方法用原核表达获得抗TAG-72单链抗体,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和Western blot得以验证;用免疫组化方法检测TAG-72抗原在PGC的表达。结果通过原核表达获取大小为31kDa的抗TAG-72单链抗体并得以证实。TAG-72抗原在胆囊良、恶性组织阳性率分别为59.6%、6.7%(P〈0.05)。高分化PGC的TAG-72抗原表达显著低于中低分化PGC(P〈0.05);肿瘤直径≤2cm者TAG-72表达显著低于〉2cm者(P〈0.05);在PGC Nevin临床分期Ⅰ~Ⅲ期与Ⅳ~Ⅴ期间则无显著性差异(P〉0.05)。结论获得了抗TAC-72单链抗体的原核表达方法。TAG-72抗原可以作为一个肿瘤标志物在临床中应用,为抗TAG-72单链抗体在PGC诊治中的应用奠定实验基础。 徐宏勇 徐立 高建宏 李开宗关键词:胆囊肿瘤 单链抗体