国家重点基础研究发展计划(001CB510104)
- 作品数：9 被引量：49H指数：5
- 相关作者：张愚陈彪关云谦邹春林徐艳玲更多>>
- 相关机构：首都医科大学宣武医院首都医科大学中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市科委科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人胚皮层神经干细胞培养方法的探讨(简报)被引量：7
- 2007年
- 神经干细胞是一类具有多向分化潜能、自我复制能力，在特定条件诱因下：能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化的未分化或低分化细胞。神经干细胞的研究对于我们阐明神经发生机制，进行神经变性疾病的细胞替代治疗都有重要意义。目前．从人胚组织分离神经干细胞的方法不尽相同，对于大脑皮层神经干细胞的分离．一些学者认为机械分离即能达到分离细胞的效果，采用消化酶可能会引起细胞存活率的下降且对于分离大量细胞并无明显效果：另外一部分文献报道则主张通过一种或多种酶消化结合机械吹打达到分离细胞进行原代培养的目的。由于人胚组织来源有限，而且人胚神经细胞特别是皮层神经细胞对缺血、缺氧和损伤非常敏感，如何在完全分离细胞的同时减少细胞死亡率成为影响实验成败的关键问题：本实验进一步对两种常用基础培养基对神经干细胞成球的作用进行了比较，并采用两种消化酶进行传代。探索高效规范的人胚皮层神经干细胞培养方法．为进一步利用神经干细胞进行基因治疗和细胞移植奠定基础。
- 任萍关云谦张愚
- 关键词：干细胞皮层
- 重组α-突触核蛋白对SD大鼠黑质多巴胺能神经元的作用被引量：6
- 2004年
- 目的:研究重组人全长α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元的毒性作用。方法:原核表达、鉴定α-突触核蛋白;雄性SD大鼠30只,随机分为α-突触核蛋白注射组、六羟多巴注射组及α-突触核蛋白和六羟多巴联合注射组。用立体定位的方法分别右侧黑质注射α-突触核蛋白,六羟多巴及α-突触核蛋白+六羟多巴,左侧黑质注射等量的生理盐水,测定大鼠纹状体多巴胺含量和黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目。结果:六羟多巴和α-突触核蛋白+六羟多巴注射使注射侧多巴胺分别减少到对照侧的36.98%和21.79%,多巴胺能神经元数减少到30.81%和28.05%。而α-突触核蛋白注射对纹状体多巴胺和黑质多巴胺能神经元数目无显著影响。结论:没有发现重组α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元有明显的毒性作用。
- 周明徐胜利李尧华陈彪
- 关键词：Α-突触核蛋白黑质多巴胺能神经元SD大鼠纹状体雄性原核表达
- 利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达被引量：2
- 2006年
- 目的建立一组灵敏的检测时钟基因(c lock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况。方法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系。利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况。结果确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子。利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整。结论巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整。时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用。
- 关云谦蔡彦宁谢淑朱宛宛徐艳玲张愚陈彪
- 关键词：巢式聚合酶链反应时钟基因单细胞
- 氧化应激诱导多巴胺能MES23.5细胞α-突触核蛋白C-末端片段核转位被引量：2
- 2005年
- 目的研究α-突触核蛋白(α-Syn)和氧化应激的相互作用关系。方法用200μmol/LH2O2处理多巴胺能MES23·5神经细胞作为氧化应激的细胞模型。采用免疫荧光、硫磺素S组织化学染色和免疫印迹技术检测细胞氧化应激反应中α-突触核蛋白的表达状态和亚细胞定位。结果200μmol/LH2O2处理可诱导α-突触核蛋白从细胞浆转位到细胞核内,而且转位到细胞核内的是约10kD的α-突触核蛋白C-末端片段,而存在于细胞浆内的是完整的α-突触核蛋白。硫磺素S染色显示,转位到细胞核内的α-突触核蛋白C-末端片段呈非聚集状态。结论氧化应激可诱导多巴胺能MES23·5神经细胞α-突触核蛋白C末端约10kD的片段核转位。
- 徐胜利周明张丽燕徐艳玲张愚陈彪
- 关键词：Α-突触核蛋白氧化应激多巴胺能神经元
- 小鼠胚胎干细胞的体外培养及诱导分化成酪氨酸羟化酶阳性神经元被引量：6
- 2004年
- 探索小鼠胚胎干细胞 (ES)在体外培养及向酪氨酸羟化酶阳性神经元诱导分化的可能性。将小鼠胚胎干细胞在含有白血病抑制因子 (LIF)的ES培养基中扩增 ,并通过以下几个步骤 :胚胎体的形成、巢蛋白 (Nestin)阳性细胞的筛选、Nestin阳性细胞的体外扩增及撤除碱性成纤维细胞生长因子等后观察向酪氨酸羟化酶阳性神经元的分化。结果表明小鼠胚胎干细胞在含有LIF的特定培养基中能够稳定传代并保持不分化状态 ,经过无血清培养基的筛选和培养 ,在SonicHedgehog(SHH)及成纤维细胞生长因子 (fibroblastgrowthfactor 8,FGF8)等细胞因子的作用下能定向分化成酪氨酸羟化酶阳性神经元。这种方法有望为帕金森病等神经变性病的细胞移植治疗提供充足的细胞来源。
- 刘平邹春林关云谦刘焯霖陈彪张愚
- 关键词：小鼠胚胎干细胞体外培养诱导分化
- 干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值被引量：20
- 2004年
- 目的:观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)质粒转化小鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)的效果,以及将转化的胚胎干细胞移植入正常大鼠纹状体后,GFP质粒作为细胞存活情况示踪剂的效果。方法:首先利用感受态大肠杆菌提取大量高纯度GFP质粒DNA,然后将GFP质粒与脂质体孵育形成的转化复合物和小鼠胚胎干细胞共同孵育,使GFP质粒转入胚胎干细胞;筛选表达GFP的胚胎干细胞。将筛选后表达GFP的ESC移植入活体大鼠纹状体内,移植21d后,观察表达绿色荧光蛋白的移植细胞的存活情况。结果:GFP质粒转化以后的ES细胞团和单细胞都表达亮绿色的GFP,细胞打散计数证实大约60%的细胞携带GFP,移植21d后,大鼠脑内可见大量表达GFP的移植细胞。结论:脂质体可以将GFP质粒转入鼠的胚胎干细胞,携带有GFP的ES移植后21d,GFP可以作为示踪剂观察移植细胞的存活状况。脂质体辅助的GFP质粒转化胚胎干细胞是移植示踪的较好方法。
- 关云谦陈彪刘平邹春林张愚
- 关键词：胚胎干细胞转基因技术
- 神经干细胞条件培养液对脊髓神经组织细胞生长的作用被引量：1
- 2005年
- 目的探讨不同浓度神经干细胞条件培养液对体外培养脊髓组织中不同细胞成分生长的影响。方法从胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞;从胚胎脊髓中分离脊髓神经组织成分。采用免疫组织化学方法对分离培养的神经干细胞及培养的脊髓神经细胞进行染色鉴定。将脊髓神经组织细胞悬液置于不同浓度的神经干细胞条件培养液中培养。分析不同浓度的干细胞条件培养液对不同细胞成分生长的影响。结果与对照组比较,30%及50%浓度的神经干细胞条件培养液明显促进人脊髓神经元的生长,而其它浓度条件液对胶质细胞生长作用较强。结论人胚胎神经干细胞条件培养液对体外培养的脊髓神经元或胶质细胞促生长作用的差异与其浓度有关。
- 陈凌张帆邹春林张愚凌锋陈立华何川
- 关键词：神经干细胞条件培养液脊髓
- 胚胎干细胞“五步法”体外诱导成为神经细胞的实验观察被引量：7
- 2004年
- 目的:采用“五步法”将鼠胚胎干细胞(embryonicstemcell,ES)诱导成为神经元和胶质细胞。方法:首先将ES细胞接种到铺有明胶的培养瓶里,在无滋养层细胞的情况下生长3d,然后将细胞悬浮培养4d成为胚胎体(,胚胎体经过无血清培养基培养6d,富集nestin阳性细胞,在有丝分裂原bFGF作用下扩增6d,最后经过烟酰胺诱导分化6d,共计经过5个步骤。结果:诱导出多量表达Tuj-1的不成熟神经元(约占分化后细胞数量的80%～90%)和表达神经胶质纤维酸性蛋白的星形胶质细胞(5%～10%),还有少量表达微管相关蛋白Ⅱ的成熟神经元(5%～10%)。结论:“五步法”诱导使胚胎干细胞在分化过程中处于不同的阶段,最终诱导出大量不成熟的神经元,少量星型胶质细胞和成熟神经元。为利用不同成熟度的分化细胞移植治疗神经系统疾病提供了充足的细胞来源。
- 关云谦陈彪邹春林张愚
- 关键词：胚胎干细胞体外诱导神经细胞神经元神经系统疾病
- 皮层神经发生的分子调控机制
- 2007年
- 在高等动物神经发育过程中,背侧端脑神经上皮细胞在多种调控基因及环境调控因子的作用下经历了错综复杂的发育事件,逐步形成具有精细的分层结构和高级功能的神经皮层。这些发育中的调控具有严格的时间和区域特性。本文主要就皮层形成中神经干细胞增殖、分化方向及皮层神经元亚型的特化等方面的调控机制予以论述。
- 任萍关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：皮层发育神经干细胞
