国家自然科学基金(30801064)
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 穿透支原体脂质相关膜蛋白对小鼠巨噬细胞核因子κB活性的影响
- 2009年
- 目的研究穿透支原体脂质相关膜蛋白能否诱导激活小鼠巨噬细胞核因子κB(NF-κB),以了解穿透支原体潜在的致病性。方法用从穿透支原体中提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞,经Westernblot和间接免疫荧光等方法检测NF-κB是否被激活,以及NF-κB抑制剂PDTC对NF-κB活性的影响。结果穿透支原体脂质相关膜蛋白能诱导小鼠巨噬细胞激活NF-κB,且NF-κB抑制剂PDTC能部分抑制穿透支原体脂质相关膜蛋白所诱导的NF-κB激活。结论穿透支原体脂质相关膜蛋白能激活小鼠巨噬细胞NF-κB,因而可能与其致病性有关。
- 曾焱华吴移谋游晓星詹利生粟盛梅
- 关键词：穿透支原体膜蛋白核因子ΚB
- 基于生殖支原体黏附蛋白模拟表位的多抗原肽免疫效果的观察被引量：1
- 2013年
- 目的制备基于生殖支原体黏附蛋白（MgPa）模拟表位的多抗原肽（MAP），检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答的水平，为研制安全、有效的基于模拟表位的Mg表位肽疫苗奠定实验基础。方法以多聚赖氨酸为核心基质，人工合成3种含MgPa模拟表位的八分枝MAP，用反相高效液相色谱（RP—HPLC）和质谱分析对其进行纯化与鉴定。将其单独或混合免疫BALB／c小鼠。间接ELISA测定小鼠血清中的特异性IgG抗体及其亚类的水平；MTT比色法检测MAP刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖反应，并用ELISA检测其脾细胞培养上清中的IL-4和WN-γ水平。结果成功合成了较高纯度的含MgPa模拟表位的3种MAP，这3种MAP均能刺激小鼠产生IgG抗体，且以Thl型免疫应答产生的IgG2a型抗体为主；与单个MAP组相比，混合MAP免疫组小鼠产生了更多的IgG、IgGl和IgG2a抗体（P均〈0．01）；3种MAP均能特异性诱导免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖，且能刺激其产生较多的IL-4和IFN-1，混合MAP免疫组小鼠产生的IL4和IFN-γ，与单个MAP组相比差异具有统计学意义（P均〈0．01）。结论基于MgPa模拟表位的3种MAP均能刺激小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，且混合免疫组诱导的免疫应答效果比单个MAP组更好。
- 曾焱华游晓星唐双阳朱翠明余敏君吴移谋何军
- 关键词：生殖支原体黏附蛋白模拟表位多抗原肽免疫原性
- 生殖支原体粘附素蛋白MgPa的表达及其多克隆抗体的制备与纯化被引量：8
- 2010年
- 目的:制备并纯化生殖支原体(Mg)粘附素蛋白(MgPa)的多克隆抗体,为进一步探讨MgPa的生物学功能及其在Mg的临床诊断与预防方面的应用提供实验基础。方法:构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa′),重组蛋白经Western blot鉴定后用Ni-NAT亲和层析柱纯化,然后免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa′血清。用饱和硫酸铵法和溴化氰活化的琼脂糖4B亲和层析柱纯化多克隆抗体,并经Western blot鉴定免疫血清的特异性,用间接ELISA法检测免疫血清的效价。结果:在大肠杆菌中成功表达一分子量约为37kD的6×His-rMgPa′融合蛋白,免疫新西兰兔后获得了相应的多克隆抗体,利用饱和硫酸铵法和亲和层析法纯化后得到具有较高纯度的多克隆抗体,SDS-PAGE分析的结果表明所制备的多克隆抗体分子量约为150kD,Western blot结果表明制备的抗体具有较高的特异性,ELISA结果显示抗体的效价为1∶25600。结论:成功制备了高效价、高特异性的兔抗rMgPa′的多克隆抗体,为进一步研究MgPa的生物学功能、Mg的临床诊断与预防提供了重要的实验基础。
- 曾焱华吴移谋游晓星詹利生粟盛梅邓红玉
- 关键词：生殖支原体粘附蛋白多克隆抗体
- 穿透支原体LAMPs诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮并抑制细胞增殖
- 2009年
- 目的检测穿透支原体脂质相关膜蛋白能否诱导小鼠巨噬细胞产生一氧化氮(NO)及其对细胞增殖的影响,以了解穿透支原体潜在的致病性。方法用SP-4培养基培养穿透支原体并提取其脂质相关膜蛋白,用提取的脂质相关膜蛋白刺激小鼠巨噬细胞,以ELISA法检测NO的产生,并用MTT法检测其对小鼠巨噬细胞增殖的影响。结果穿透支原体脂质相关膜蛋白能以时间和剂量依赖方式刺激小鼠巨噬细胞产生NO,并且对小鼠巨噬细胞的增殖有一定的抑制作用。结论穿透支原体的脂质相关膜蛋白能诱导巨噬细胞产生一氧化氮,且能抑制巨噬细胞的增殖,因而可能与其致病性相关。
- 曾焱华吴移谋游晓星余敏君
- 关键词：穿透支原体膜蛋白一氧化氮细胞增殖
- 生殖支原体黏附素蛋白模拟表位的筛选和鉴定
- 2012年
- 目的制备兔抗重组生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa)的多克隆抗体(pAb),以期筛选MgPa的模拟表位。方法用rMgPa免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa的pAb,以此pAb为靶分子对噬菌体展示随机12肽库进行生物淘洗,随机挑取74个噬菌体克隆进行DNA测序与分析,用ELISA检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果制备了兔抗rMgPa的特异性pAb,以此抗体为靶分子对噬菌体展示肽库进行生物淘洗后,特异性噬菌体克隆得到了明显富集。经对74个噬菌体克隆所展示的外源性多肽序列进行比较分析,共可大致分为3组一致性的核心序列:P-S-A-A/V-X-R-F/W-E/S-L-S-P,A-K-I/L-T/Q-X-T-L-X-L和K-S-L-S-R-X-D-X-I。ELISA结果说明36个噬菌体克隆能与pAb发生特异性结合,因此,这三组核心序列可能是MgPa的模拟表位。结论成功制备了兔抗rMg-Pa的pAb,并筛选到MgPa的3个可能的模拟表位,为进一步研究Mg的诊断与预防提供一定的实验依据。
- 曾焱华邓仲良余坚朱翠明余敏君张红
- 关键词：生殖支原体多克隆抗体噬菌体展示肽库模拟表位
- 应用噬菌体展示肽库筛选生殖支原体黏附蛋白的模拟表位被引量：3
- 2012年
- 目的利用纯化的兔抗重组生殖支原体黏附素蛋白（rMgPa）的多克隆抗体（pAb）从噬菌体展示随机12肽库筛选MgPa的模拟表位。方法用纯化的兔抗rMgPa的pAb对噬菌体随机12肽库进行生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆进行DNA测序与分析，并用MIMOX对噬菌体克隆所展示的肽序列进行生物信息学分析。用ELISA、竞争性结合试验和Westernblot检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果4轮生物淘洗后特异性噬菌体克隆得到了明显的富集。依据氨基酸组成的不同，74个噬菌体克隆所展示的肽序列可大致分为3组。经对肽序列进行比较分析以及用MIMOX进行生物信息学分析，结果表明这3组的核心序列分别为：P—S-A-A／V—X—R—F／w—E／S．L—S—P、A—K—L／L-T／Q-X—T—L—X—L和K-S-L-S—R—X—D—X-I。ELISA、竞争性结合试验和Westernblot方法检测的结果表明噬菌体能与pAb发生特异性结合，说明其可能足MgPa的模拟表位。结论成功筛选到MgPa的3个可能的模拟表位，为研制基于Mg抗原表位的诊断试剂与多肽疫苗奠定了一定的实验基础。
- 曾焱华游晓星何军刘良专唐正宇余敏君吴移谋
- 关键词：生殖支原体黏附蛋白噬菌体展示肽库模拟表位
