国家自然科学基金(30801063)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李素波高红伟宫锋王颖丽季守平更多>>
- 相关机构：军事医学科学院解放军第307医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- A→O血型转变制备通用型红细胞过程中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的:建立一种检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法。方法:利用α-N-乙酰半乳糖胺酶的特异性兔多抗和抗His的单抗,采用间接ELISA法,建立检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,并用此方法检测血型转变过程中通用型红细胞及洗涤上清中残留的α-N-乙酰半乳糖胺酶。结果:建立了检测微量α-N-乙酰半乳糖胺酶的方法,该方法的检测下限为1 ng/mL;通过对洗涤后的红细胞和洗涤液中残留酶量的检测,确定经过4次洗涤后,残留酶量达到检测水平以下。结论:本方法的建立,为血型转变的通用型红细胞的安全性评价提供了检测方法,并为进一步的临床应用奠定了基础。
- 高红伟李素波鲍国强张雪徐丽娟檀英霞王颖丽季守平宫锋
- 关键词：血型转变
- a-N-乙酰半乳糖胺酶多克隆抗体的制备及特异性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备a-N-乙酰半乳糖胺酶(NAGA)的高效价高特异性的兔多克隆抗体。方法利用pET22b-NA-GA/BL21(DE3)工程菌株表达NAGA,经Ni2+Sepharose 6 FF亲合层析,Phenyl Sepharose 6 FF疏水层析两步纯化,得到纯度>95%的NAGA作为抗原免疫新西兰白兔,获得NAGA的兔抗血清,并经HiTrap rProtein A柱纯化获得高效价高特异性的抗体;用间接ELISA法检测抗体效价,用Western blotting评价抗体特异性。结果制备得到的NAGA兔多克隆抗体血清效价为1×106,经过rProtein A柱纯化后抗体蛋白纯度>95%,效价为1×105;Western blotting显示:该NAGA兔多克隆抗体只与NAGA发生特异性反应。结论获得了NAGA的高效价高特异性的兔多克隆抗体。
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- 关键词：蛋白纯化特异性
- 重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种稳定性研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨重组α-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌种的遗传稳定性。方法在有选择压力(AMP+)条件下,将重组a-N-乙酰半乳糖胺酶工程菌菌株在LB固体培养基上采用划线法连续传60代,每隔20代取样保存菌种,最后同时进行菌体形态、生长速度和抗生素抗性、质粒稳定性、限制酶切图谱、测序、表达量和酶活力及Westernblotting检测。结果第0、20、40、60代菌的菌体形态、生长速度和抗生素抗性等与原代菌株无明显差异;LB固体培养基上传60代后质粒稳定性接近100%;DNA测序未见α-N-乙酰半乳糖胺酶基因变异;SDS-PAGE图谱显示,α-NAGA表达水平无明显差别。Western blotting检测显示重组α-NAGA能与抗His的单抗特异结合。结论α-N-乙酰半乳糖胺酶重组质粒pET22b-α-NAGA在工程菌株中具有良好的遗传稳定性。
- 高红伟李素波金泗虎王玲燕王颖丽张丽郁成雨季守平宫锋
- 关键词：传代
