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江苏省科技成果转化专项资金(BA2009083)
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花鳗鲡重组促黄体生成素在毕赤酵母中的表达
2012年
采用聚合酶链反应从花鳗鲡垂体cDNA中分别扩增出GTHα、LHβ基因,再利用搭桥技术,中间以lin-ker将两个基因连接成单个基因LHβα。然后利用双酶切、连接,将LHβα基因连接到载体pPICZαA中,构建出促黄体生成素的酵母共表达载体pPICZαA-LHβα。再利用电转化法将其转入到酵母野生型菌株X-33中,在含不同浓度的zeocinYPDS平板上筛选高拷贝转化子,阳性克隆经φ=0.7%甲醇诱导表达,表达产物采用SDS-PAGE和western blot进行分析,得到所表达的产物相对分子质量约为45 000。
毛黎敏
张勇
李阳源
黄海
李波
李文笙
陈国华
林浩然
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花鳗鲡
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毕赤酵母
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