广州市医药卫生科技项目(2009-YB-154)
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 相关作者：何伟文袁忠民李明昌陆永建李丹更多>>
- 相关机构：广州医学院第二附属医院中山大学附属第三医院中山大学更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 过表达E2F1保护神经元依赖其转录活性
- 2009年
- 目的探讨E2F1对小脑颗粒神经元死活的影响及机制。方法构建表达质粒pcDNA-E2F1(pE2F1)及突变体pcDNA-E2F1-m132(pm132),转染293细胞验证表达,转染小脑颗粒神经元用6×E2F-luciferase报道基因检测转录活性。转染神经元24 h或48 h后Hoechst 33258核染色,统计转染pE2FI及pm132神经元(GFP阳性细胞)的核固缩率(即凋亡率);或者转染48 h后进行25K、5K处理12hr,统计凋亡率。结果构建质粒表达E2F1及突变体E2F1-m132成功,E2F1具有转录活性而E2F1-m132没有;表达E2F1及E2F1-m132均未诱导神经元凋亡(P>0.05);表达E2F1抑制5K诱导的神经元凋亡(P<0.05),而E2F1-m132没有抑制效应。结论E2F1抑制神经元凋亡依赖其转录活性。
- 袁忠民李丹王进刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：E2F1转录活性小脑颗粒神经元凋亡
- 谷氨酸促脑胶质瘤细胞侵袭的机制研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨谷氨酸促胶质瘤细胞侵袭的机制,检测MMP-2,MMP-9和uPAR的表达和激活。方法体外培养胶质瘤细胞株U251-MG,分别用50μM和100μM谷氨酸作用24后,Matrigel方法检测细胞侵袭;用含有100μM谷氨酸或同时含有谷氨酸受体阻断剂2μM MK-801的培养基作用U251-MG 24小时,收集细胞用相对定量PCR检测MMP-2及MMP-9 mRNA表达水平,收集上清后进行凝胶酶谱分析(Zymography Assay)检测MMP-2、MMP-9的活性变化;检测谷氨酸刺激后uPAR的mRNA表达水平。结果谷氨酸浓度依赖的促进胶质瘤细胞株U251-MG侵袭;谷氨酸刺激没有改变U251-MG细胞中MMP-2和MMP-9表达水平,但使MMP-2活性增强,MMP-9活性没有变化:谷氨酸上调uPAR的表达。结论谷氨酸可能通过上调uPAR促进胶质瘤细胞发生MMP-2活性依赖的侵袭。
- 袁忠民徐利民王建刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：谷氨酸胶质瘤肿瘤侵袭MMP-2UPAR
- 尼莫地平诱导小脑颗粒神经元凋亡及机制研究
- 2010年
- 目的探讨尼莫地平能否诱导小脑颗粒神经元凋亡及可能机制。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠小脑颗粒神经元,体外培养7d,用含10μM尼莫地平培养基处理神经元24h,对照组为含1‰二甲亚砜(DMSO)培养基处理细胞。Hoechst33258染胞核检测凋亡率。Westernblot检测c-Fos和c-Jun蛋白的表达水平;腺病毒作载体过表达c-Fos和负显性c-Jun突变体阻断c-Jun功能,检测能否抑制尼莫地平诱导的神经元凋亡,免疫细胞化学方法检测腺病毒感染率。结果对照组神经元的凋亡率为(10±4)%,尼莫地平处理6、12、24h后神经元的凋亡率分别为(13±4)%、(28±5)%、(45±3)%。尼莫地平处理使c-Fos表达下调,但c-Jun表达水平上调。腺病毒Ad-c-Fos和Ad-c-JunDN(负显性c-Jun突变体)对神经元感染率为85%以上,过表达c-Fos或负显性c-Jun突变体使尼莫地平诱导的神经元凋亡率从(42±6)%减少到(28±6)%或(20±3)%。结论尼莫地平通过下调c-Fos和上调c-Jun表达诱导小脑颗粒神经元凋亡。
- 何伟文王翦闵志群李明昌罗景燕袁忠民
- 关键词：尼莫地平小脑颗粒神经元凋亡C-FOSC-JUN
- 过表达转录因子E2F1对小脑颗粒神经元凋亡的影响
- 2009年
- 目的探讨过表达转录因子E2F1对小脑颗粒神经元凋亡的影响。方法构建pE2F1表达质粒,转染293细胞验证其表达,双报道基因系统检测其转录活性。体外培养小脑颗粒神经元,钙磷法转染pE2F1表达,转染pcDNA空载体组作为对照,于转染12、24、48 h后运用Hoechst 33258染色检测转染细胞的核固缩率(即凋亡率);转染pE2F1和pcDNA 48 h后的小脑颗粒神经元进行高钾和低钾处理12 h,统计细胞凋亡率。结果成功构建pE2F1表达质粒,且证实该质粒具有转录活性。与转染pcDNA空载体组比较,转染pE2F1后不同时间点小脑颗粒神经元的凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。pE2F1转染组和pcDNA转染组高钾处理后的凋亡率分别为(12±4)%和(11±3)%,差异无统计学意义(P>0.05);低钾处理后的凋亡率分别为(42±3)%和(30±2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达E2F1对小脑颗粒神经元的凋亡无明显影响,但抑制低钾处理诱导的小脑颗粒神经元凋亡。
- 袁忠民李丹王进刚李明昌陆永建何伟文
- 关键词：E2F1过表达小脑颗粒神经元凋亡
- ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制。方法体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响。结果低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物。分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P<0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P>0.05)。结论低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡。
- 袁忠民李丹罗景燕何伟文
- 关键词：C-JUN小脑颗粒神经元凋亡
