江西省教育厅科学技术研究项目(JJJ11354)
- 作品数：4 被引量：25H指数：4
- 相关作者：陈钦开吕金雷王瑜杨柳罗来敏更多>>
- 相关机构：南昌大学第一附属医院南昌大学北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目江西省自然科学基金更多>>
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- SiRNA干扰对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4／转接子髓分化因子88信号通路的影响被引量：4
- 2013年
- 目的通过siRNA（RNAi）干扰选择性下调TLR4基因的表达，探讨高糖对大鼠肾小管上皮细胞（NRK．52E）T0ll样受体4（toll－like receptor4，TLR4）及其转接子髓分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）和炎性因子分泌的影响。方法设计并合成3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段，以带有红色荧光的BLOCK—ITAlexaFluor作为阴性对照，荧光显微镜下观察细胞转染效率，实时定量PCR检测TLR4mRNA的表达变化。挑选基因沉默效率最佳的siRNA用于进一步实验，细胞被分5组：（1）正常糖对照组（NG）；（2）高糖组（HG）；（3）HG＋血管紧张素Ⅱ（AngII）＋空转组；（4）HG＋AngⅡ＋siRNA组；（5）HG＋AngⅡ＋厄贝沙坦（IrB）组。采用实时定量PCR法检测TLR4、MyD88mRNA的表达，Western印迹检测TLR4、MyD88及核因子kappaB（NF-kB）蛋白表达；ELISA法检测巨噬细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素6（IL-6）的表达。结果与NG组比较，高糖组TLR4／MyD88mRNA及TLR4、MyD88、NF-kB蛋白表达水平明显上调（均P〈0．01），细胞上清MCP-1、IL-6水平亦升高（P〈0．01）；空转组与高糖组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；SiRNA组、ARB组TLR4、MyD88mRNA明显下调，TLR4、MyD88及NF-kB蛋白明显下调，MCP-1、IL-6表达亦下调（均P〈0．01）。结论高糖上调小管上皮细胞TLR4／MyD88信号及炎性细胞因子表达，Ang11可增强此效应；特异性基因沉默可阻断由高糖及AngII诱导的TLR4信号通路的激活，并下调炎性介质的释放；TLR4信号通路在高糖、高肾素环境肾小管上皮细胞炎性反应机制中发挥关键作用。
- 吕金雷杨玉娟吕柳青王瑜杨柳陈钦开时军
- 关键词：高糖小干扰RNA
- 血管紧张素Ⅱ正向调节高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞TLR4信号及炎性因子表达被引量：10
- 2013年
- 目的观察血管紧张素Ⅱ（AnglI）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4（TLR4）信号通路与炎性因子表达的影响，论证AngⅡ对高糖环境下肾小球系膜细胞天然免疫炎性反应的正向调节作用。方法细胞同步化后分组：正常对照（5．6mmol／L葡萄糖）组、高糖（25mmol／L葡萄糖）组、AnglI（10-7mmol／L）组、高糖（25mmol／L葡萄糖）＋AnglI（10-7mmol／L）组和AngⅡ（10-7mmol／L）＋血管紧张素1型受体（ATlR）阻断剂厄贝沙坦（10-5mmol／L）组和AngII（10-7mmol／L）＋厄贝沙坦（10-5mmol／L）＋TLR4阻断剂（10mg／L）组。分别于不同时间收集细胞，12h时采用实时定量PCR检测TLR4及其转接子髓分化因子88（MyD88）的表达，24h时免疫荧光检测TLR4蛋白表达，24h时Western印迹法检测TLR4、MyD88及核因子KB（NF—KB）蛋白的表达，同时收集24h时细胞上清液用ELISA法检测白细胞介素6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平。结果与正常对照组相比，高糖和AngⅡ组作用12h时TLR4、MyD88mRNA表达显著上调（P〈0．01），24h时TLR4、MyD88以及NF—KB蛋白表达显著上调（P〈0．01），同时炎性细胞因子IL-6、MCP-1水平亦显著上调（P〈0．01）；与高糖或AngII组相比，AngⅡ和高糖共同作用肾小球系膜细胞后TLR4、MyD88和NF—KB蛋白以及IL-6、MCP-1的水平进一步上调（P〈0．01）；ATlR、TLR4阻断剂可显著下调AnglI诱导的高糖环境下系膜细胞TLR4、MyD88表达及IL．6、MCP-1水平（P〈0．01）。结论高糖和高肾素导致大鼠肾小球系膜细胞炎性因子表达增加均与TLR4．MyD88信号通路的激活相关，TLR4信号通路在糖尿病系膜细胞天然免疫炎性反应机制中发挥关键效应。AngⅡ对高糖环境下大鼠。肾小球系膜细胞炎性因子释放起正向调节作用。
- 吕金雷徐建华付志晖姜和王缨罗来敏陈钦开
- 关键词：肾小球系膜细胞TOLL样受体4高糖炎性因子
- TLR4在糖尿病肾病大鼠肾组织中的表达被引量：8
- 2013年
- 目的观察toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、白介素-1(interleukin-1,IL-1)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型中的表达变化,并观察厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠肾组织TLR4表达的影响,初步探讨TLR4在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法通过高糖高脂饮食4周+腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)构建SD大鼠DN模型。实验分正常对照组(NC组,n=8),模型对照组(MC组,n=20),厄贝沙坦治疗组(ARB组,n=20)。在成模后2、4、6、8周分别检测各组大鼠血糖、24h尿蛋白;于4、8周末取出肾脏行HE染色观察肾组织病理改变,免疫组化检测肾组织TLR4蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)法检测大鼠血清IL-1含量。结果 HE染色示NC组肾小球结构完整,无明显细胞增生,肾小管未见明显异常;MC组和ARB组可见部分肾小管上皮细胞空泡变性,肾小球体积肥大,炎性细胞浸润。免疫组织化学示肾组织TLR4表达MC组、ARB组均以肾小球、肾小管上皮细胞,细胞浆表达为主,ARB组表达较MC组显著增强(P<0.05),MC组表达比NC组显著增强(P<0.05)。ELISA检测示IL-1含量MC组较NC组显著升高(P<0.05),ARB组介于NC组与MC组之间,但NC组与ARB组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖尿病肾病可能通过上调TLR4的表达,进而上调炎性因子IL-1的表达而引起炎性反应,刺激肾脏基底膜增生引起肾小球、肾小管为主的肾脏病变,厄贝沙坦可通过下调TLR4的表达,对糖尿病肾病起到延缓肾功能衰竭的保护作用。
- 王瑜吕柳青张莉杨柳陈钦开吕金雷
- 关键词：糖尿病肾病TOLL样受体4白介素-1炎症反应
- 高糖和血管紧张素Ⅱ对人肾小管上皮细胞Toll样受体4信号表达及炎性和纤维化因子的影响被引量：7
- 2016年
- 目的通过研究高糖和血管紧张素Ⅱ（AngII）环境下人肾小管上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达及其相关的炎性和纤维化因子的变化及TLR4siRNA的干扰作用，从天然免疫角度探讨糖尿病。肾病（DN）发病机制和靶向干预措施。方法设计并合成3对针对人TLR4基因的特异性siRNA片段，以带有红色荧光的BLOCK-ITAlexaFluor作为阴性对照，荧光显微镜下观察细胞转染效率，实时定量PCR检测TLR4mRNA的表达变化。确定TLR4siRNA基因沉默效果较佳后再进一步实验。实验分2部分进行，第1部分细胞分3组：正常糖对照组（NG，5．5mmol／L葡萄糖）、甘露醇组（M，5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）和高糖组（HG，25mmol／L葡萄糖），初步验证高糖、高渗的影响。第2部分7组：NG组、HG组、AngⅡ（10-7mmol／L）组、AnglI＋空载体对照组、HG＋空载体对照组、AnglI＋TLR4siRNA转染组及HG＋TLR4siRNA转染组。采用实时定量PCR法检测TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、热休克蛋白47（HSP47）mRNA的表达；Western印迹法检测TLR4、MyD88、HSP47、核因子KB（NF．KB）、Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）的蛋白表达；ELISA法检测细胞上清液单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素6（IL-6）的水平。结果与NG组比较，甘露醇组TLR4、MyD88蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05）；HG、AngⅡ组TLR4、MyDS8、HSP47mRNA及TLR4、MyD88、NF．KB、HSP47、ColⅣ蛋白表达均显著上调（p〈0．01），细胞上清液MCP-1、IL-6水平亦升高（P〈0．01）；TLR4siRNA转染后，与HG组或AngU组相比上述指标均显著下调（P〈0．01）；空载体转染后，与HG组或AngⅡ组相比上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖或血管紧张素Ⅱ均刺激人肾小管上皮细胞TLR4信号并引起天然免疫应答，导致炎性和纤维化因子上调。特异性基因沉默可通过阻断由高糖或AngⅡ诱导的TLR4信�
- 熊梅梅吕柳青肖红波程玉花吕金雷王瑜陈钦开
- 关键词：TOLL样受体4肾小管上皮细胞天然免疫应答
