国家科技重大专项(2011zx08008-003)
- 作品数：9 被引量：29H指数：4
- 相关作者：潘庆杰姜颖许登高张钦恺华晓敏更多>>
- 相关机构：青岛农业大学辽宁省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项'泰山学者'建设工程专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 山羊精原干细胞的鉴定及培养体系优化的研究被引量：1
- 2016年
- 该研究优化了山羊精原干细胞（goat spermatogonial stem cells,g SSCs）培养体系,使山羊精原干细胞能在体外长期培养,维持自我更新的能力并保持未分化状态。取3~5月龄山羊睾丸,采用两步酶消法结合差速贴壁方法得到山羊精原干细胞悬液,分别通过形态学观察、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）染色、特异基因表达及蛋白质水平的分析对培养的细胞进行鉴定;并以山羊睾丸支持细胞（goat sertoli cells,g SCs）、小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts,MEFs）和层黏连蛋白（laminin,L）为饲养层,观察饲养层对山羊精原干细胞体外增殖的影响。结果表明,山羊精原干细胞体外增殖形成克隆簇,AKP染色呈阳性。经RT-PCR检测,Oct-4、C-myc、Cyclin D1、Ngn3和TERT等干细胞特异基因均有表达。细胞免疫组化结果显示,Oct-4、SSEA-1、α6-integrin、Vasa和Thy-1蛋白质呈阳性。克隆簇统计显示,在山羊睾丸支持细胞上形成的山羊精原干细胞（goat spermatogonial stem cells,g SSCs）克隆数与其他两组比较差异显著（P〈0.05）。山羊睾丸支持细胞饲养层上的精原干细胞可在体外传3~4代,培养时间为2个月。结果证明,通过两步酶消法和差速贴壁法可以分离获得山羊精原干细胞,且山羊睾丸支持细胞能够促进g SSCs的增殖。
- 张钦恺姜颖王明明董焕声尉玉杰潘庆杰
- 关键词：山羊精原干细胞睾丸支持细胞饲养层
- 玉米DH系产量及农艺性状配合力分析被引量：4
- 2012年
- 以农大高诱1号诱导系和辽3162(大斑病感病材料)×A619HtN(大斑病抗病材料)组配的材料为亲本获得的5个DH(doubled haploid)系与辽3162、A619HtN和中106为父本系组配的15个杂交组合为试材,采用数量遗传学方法进行DH系产量和田间农艺性状的配合力分析。结果表明:诱导DH系的基础材料决定其诱导后代的类型,利用DH育种技术可以快速改良自交系的一般配合力,组配优良的杂交组合。
- 刘欣芳马骏王延波刘继国孟庆国李明王金艳李泉木姜敏
- 关键词：玉米DH系
- 山羊前体脂肪细胞体外培养试验被引量：3
- 2013年
- 本试验对山羊前体脂肪细胞体外培养传统消化法以及细胞培养液的组成进行改良。结果表明经过改良的消化培养法得到的原代细胞培养效率提高,细胞形态良好,传代后细胞增殖活性无明显降低。经诱导培养后细胞分化成脂肪细胞,细胞内出现脂滴,可被油红O染成红色。故改良消化培养法是一种有效的山羊前体脂肪细胞培养方法,为进行山羊前体脂肪细胞的相关研究提供良好的技术平台。
- 曲贞晓刘金凤姜颖潘庆杰
- 关键词：山羊前体脂肪细胞细胞培养增殖分化
- 小鼠adiponectin的甲基化敏感性检测及其启动子克隆被引量：1
- 2013年
- 本试验通过对脂肪组织特异表达的脂肪因子adiponectin调控区域4个CpG位点在心、肝、脾、肺、肾、骨骼肌、腹脂、内脏脂肪中的甲基化程度以及adiponectin mRNA表达水平的检测,表明adiponectin在mRNA水平的表达与其调控位点的甲基化程度显著相关;同时采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂联素的启动子,通过DNA重组技术将该基因的启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-P(adi)重组质粒,通过分子克隆测序方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测表明P(adi)具备驱动报告基因表达的活性,为今后制备转基因动物的研究奠定基础。
- 许登高张敏曲贞晓潘庆杰
- 关键词：转基因动物
- 山羊睾丸支持细胞的分离培养及鉴定被引量：6
- 2014年
- 本实验通过改良方法使山羊睾丸支持细胞能够在体外快速分离且较长时间培养。将山羊睾丸组织剪碎后经2种混合酶溶液(4 mg/m L胶原酶Ⅳ与0.2%透明质酸酶混合液和0.25%胰酶与10μg/m L DNase Ⅰ混合液)次第消化,利用差速贴壁法纯化细胞悬液中的支持细胞,对培养72 h的细胞经台盼蓝染色鉴定细胞活率,观察支持细胞形态学特征及生长增殖情况,油红O染色、H.E.染色及福尔根染色对支持细胞进行鉴定。结果表明:染色结果观察到在细胞核周围有空泡状结构且有核小体存在,表明本实验分离培养的是山羊睾丸支持细胞,且纯度较高,充分证明了该改良方法可有效的分离山羊睾丸支持细胞并在体外较长时间培养。
- 姜颖潘庆杰张钦恺李岩徐君君
- 关键词：睾丸支持细胞体外培养山羊
- 浅谈精原干细胞研究进展被引量：1
- 2014年
- 精原干细胞是雄性动物体内精子发生过程中起重要作用的精原细胞类型,不但具有干细胞特性,还能定向分化为雄性配子将自身基因传递给后代。除此之外,体外培养和鉴定精原干细胞为移植和转基因提供了基础。我们对精原干细胞的生物学特性、分离培养、鉴定、移植及精原干细胞介导的转基因进行简要概述。
- 姜颖潘庆杰
- 关键词：精原干细胞生物学特性转基因
- Fat-1基因及其功能的研究进展被引量：5
- 2012年
- fat-1基因来源于秀丽隐杆线虫C.elegans,翻译产物是ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶,此酶的功能是以18-20碳的ω-6 PUFAs为底物进行脱氢反应,生成相应的ω-3 PUFAs,平衡体内ω-6/ω-3 PUFAs的比例,对于预防和治疗心脑血管、肿瘤、精神分裂症等疾病有重要的作用。本文根据国内外对fat-1基因及编码产物的研究现状,分别从它们的结构、作用机制、检测、功能等方面进行了相关的阐述。
- 华晓敏陈俏俏潘庆杰
- 关键词：DHAEPA
- 哺乳动物CpG岛甲基化研究进展被引量：8
- 2012年
- DNA甲基化修饰是一种重要的表观遗传修饰,对基因表达调控具有重要影响作用。在哺乳动物中,DNA甲基化主要发生在CpG岛,其通过影响染色质结构、DNA构象、稳定性以及与蛋白质相互作用方式等来发挥作用,调控基因的表达。在转基因动物中,外源基因的表达与DNA的甲基化密切相关,CpG岛甲基化介导的基因沉默往往使外源基因不表达或低表达。而在人类基因组中异常的DNA甲基化常常伴随着疾病的发生。本文通过对哺乳动物中CpG岛甲基化研究现状及甲基化调控基因表达可能的分子机制进行了综述,并对其发展趋势及应用前景进行了展望。
- 许登高周扬潘庆杰
- 关键词：哺乳动物CPG岛甲基化
- 玉米单倍体育种技术研究初探
- 本试验以DH(Doubled Haploid)系组配的杂交组合为对象,采用数量遗传学方法初步研究DH系田间农艺性状的遗传变异规律。结果表明诱导DH系的基础材料决定其诱导后代的类型。DH系的株高、穗位、雄穗长、雄穗一级分支...
- 刘欣芳王金艳马骏王贺刘继国孟庆国姜敏
- 关键词：玉米DH系GCASCA
- 文献传递
- 脂肪组织特异性表达载体的构建
- 2012年
- 采用PCR技术克隆了小鼠脂肪组织特异表达的脂肪酸结合蛋白ap2基因增强子和启动子,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-ap2重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组质粒进行鉴定,并转染小鼠前脂肪细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度。结果表明,本实验克隆的ap2基因增强子和启动子的碱基组成与GenBank中的ap2基因序列完全一致,通过DNA重组技术将该基因增强子和启动子重组于pEGFP-N1真核表达载体上,成功构建了脂肪组织特异表达的重组质粒。为以后的转基因动物的研究奠定了基础。
- 华晓敏许登高潘庆杰
- 关键词：增强子启动子
