国家自然科学基金(31100584)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陈振明王志国赖敦岳陈雪君更多>>
- 相关机构：杭州师范大学浙江台州清泉医药化工有限公司更多>>
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- 相关领域：化学工程更多>>
- 随机突变提高单胺氧化酶活性被引量：1
- 2014年
- 前期获得了一个对底物美西律具有一定活性的单胺氧化酶突变体A-1(F210V/L213C)。为进一步提高其酶活性,利用MegaWHOP PCR构建了库容约为104的随机突变库。筛选后获得了一个最优突变酶ep-1,比活力为A-1的189%。选择性测定结果表明,酶的对映体选择性有较大提高,E值由101提高到282;动力学常数测定揭示,酶催化效率有较大提高,kcat/Km由0.001 51 mmol/(L?s)提高到0.002 89 mmol/(L?s)。和A-1酶相比,在所测定的11种胺类底物中,ep-1对其他7种底物的比活力有较明显提高,对其他4种底物的比活力变化不大。序列分析表明,ep-1的突变为T162A。分子动力学模拟结果提示,该突变主要通过修正通道氨基酸的二级结构和扩大活性口袋来发挥作用。
- 陈雪君马元慧邵建华赖敦岳王志国陈振明
- 关键词：单胺氧化酶易错PCR酶活力分子动力学模拟
