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中间苍白杆菌SCUEC4菌株中尼古丁降解相关ocnC基因的克隆与表达被引量：1: 2020年; 对中间苍白杆菌SCUEC4菌株中与尼古丁降解相关的ocnC基因进行克隆和表达,并对OcnC蛋白的表达条件进行优化,通过PCR扩增获得ocnC基因,构建重组质粒pET28a(+)-ocnC,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行异源表达,采用不同的IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对OcnC蛋白进行诱导表达.结果表明:ocnC基因大小为1344 bp,编码蛋白分子量为48.0 kDa,重组表达菌株在IPTG浓度为1.0 mmol·L^-1、诱导温度在37℃及诱导表达时间在20 h的优化表达条件时,OcnC蛋白的表达量较高.; 夏珍珍姚家成黄粤冯喆赵新颖李晓华

一株α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及其产酶条件优化: 2023年; 从湖南省长沙县养殖场牛胃秸秆发酵物中筛选获得了一株高产α-淀粉酶的菌株,命名为SCUEC8.通过对其形态学观察和生理生化特性,结合16S rDNA序列对比分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).探讨了不同碳源、氮源、培养条件等因素对枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株产酶的影响,结果表明:在培养时间为16 h、pH为6.0、培养温度为37℃、碳源为20.0 g·L^(-1)的麦芽糖、氮源为15.0 g·L^(-1)的胰蛋白胨、金属离子为1.0 g·L^(-1)的Mn^(2+)时,枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株生长量和α-淀粉酶的活性较高.; 王圣心王力张建国许琪寻立之李晓华; 关键词：Α-淀粉酶产酶条件优化

具有抗稻瘟病菌活性的ⅡW1菌株的分离鉴定及其接合转移方法的建立被引量：2: 2020年; 从湖北省神农架地区土壤中筛选出一株具有抗稻瘟病菌活性的ⅡW1菌株,采用菌块法测定了ⅡW1菌株对稻瘟病菌的抑菌活性,通过形态结构、生理生化和16S rDNA基因序列同源性比对对ⅡW1菌株进行鉴定,同时对链霉菌ⅡW1菌株attB序列进行克隆,并建立接合转移的方法.结果表明:ⅡW1菌株属假灰色链霉菌,链霉菌ⅡW1菌株对稻瘟病NO-1菌株和168菌株的抑菌圈直径分别为29.7 mm和27.4 mm;链霉菌ⅡW1菌株attB序列具有位点特异性重组所必须的核心位点5′-TT-3′.含ΦC31attP位点的整合型质粒pSET152通过两亲接合转移导入链霉菌ⅡW1菌株.; 李晓华冯喆黄粤马婷婷姚家成夏珍珍; 关键词：稻瘟病菌

武汉市东湖不同区域水体水质和富营养化分析被引量：4: 2016年; 以武汉市东湖为对象,通过定点定时采样、水质分析等方法,对武汉市东湖不同区域不同月份水体水质和富营养化进行了研究。结果表明,10月东湖水体总磷、总氮、氨氮和化学需氧量最大,分别为0.18、1.08、0.46、39.30 mg/L。东湖水体综合营养指数随月份呈现规律性变化趋势,即10月>8月>12月>2月>4月,4月和2月属于轻度富营养,10月、8月和12月属于中度富营养。东湖4个区域水体综合营养指数变化趋势为D区域>A区域>B区域>C区域,东湖D区域和A区域水体属于中度富营养,东湖B区域和C区域水体属于轻度富营养。东湖4个区域湖水细菌总数与湖水富营养化程度呈现正相关,D区域湖水富营养化程度最重,湖水细菌总数也最多、湖水富营养化程度最轻,湖水细菌总数也最少。; 陶新园沈冬赖树锦吴金龙马婷婷梅枫刘涛李晓华; 关键词：水质富营养化细菌总数

尼古丁降解菌SCUEC1菌株的分离及其降解基因被引量：8: 2017年; 【目的】分离并鉴定1株具有尼古丁降解能力的细菌,研究其尼古丁降解特性并对其降解基因进行分析,为尼古丁微生物降解提供基础。【方法】从烟草种植地土壤中分离1株具有尼古丁降解能力的细菌,通过16S r RNA基因和生理生化特性对该菌株进行鉴定,检测该菌株尼古丁降解率与生长量的关系,并进一步对该菌株进行尼古丁浓度耐受性测定,采用高通量测序技术对菌株进行全基因组测序,BLAST比对分析尼古丁降解相关基因。【结果】筛选到1株具有尼古丁降解能力的细菌,经鉴定命名为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumerficience)SCUEC1菌株,根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解率可达到94.81%,该菌株在尼古丁浓度为0.50–5.00 g/L范围内生长良好且有较高的尼古丁降解能力。对根癌土壤杆菌SCUEC1菌株全基因组序列进行BLAST比对分析,推测该菌株的尼古丁降解代谢途径与中间苍白杆菌SYJ1菌株的尼古丁降解途径相似。【结论】本研究揭示了Agrobacterium tumerficienceSCUEC1菌株具备尼古丁降解特性,初步推测出尼古丁降解相关基因和降解代谢途径,为尼古丁微生物降解提供基础。; 梅枫孔雯李阳马婷婷皮婷何冬兰程国军刘涛李晓华; 关键词：尼古丁降解特性代谢途径

一株产碱性蛋白酶菌株的筛选鉴定及酶学特性研究被引量：16: 2017年; 【目的】从丝茅草中筛选得到产蛋白酶菌株并研究驯化过程中微生物群落结构,以及探究该菌株的生长特性和蛋白酶的酶学特性。【方法】通过高通量测序探究来源于丝茅草的菌株在不同培养条件下细菌种类及丰度,通过选择性培养基来筛选能够分解酪素并产生蛋白酶的菌株,通过单因素试验方法确定环境因子对菌株生长和蛋白酶活性的影响。【结果】微生物群落结构在基础培养基和牛肉膏蛋白胨培养基中不同。通过含酪素的选择性培养基里筛选到1株产蛋白酶菌株H-16,经生理生化试验和16S r DNA鉴定知该菌株属于Escherichia marmotae,菌株H-16能产生分子量为70 k Da左右的单亚基蛋白酶。胰蛋白胨、蔗糖、30°C或35°C、p H 7分别为菌株生长的最适氮源、碳源、温度和p H。菌株H-16分泌的蛋白酶最适p H为6–8,在50°C及6%盐度以下酶活性几乎不受影响。此外,Cu(II)和Ag(I)等金属离子能够抑制蛋白酶的活性。【结论】该菌株H-16为嗜中温菌株,能够产生碱性蛋白酶。; 万文结薛芷筠张泽文李晓华程国军何冬兰; 关键词：菌株筛选分子鉴定酶学性质

基于MiSeq测序分析酸性农作物土壤细菌群落结构与多样性被引量：6: 2019年; 为分析酸性农田土壤中微生物群落结构,探寻酸化土壤的综合治理途径,以湖北恩施土家族苗族自治州利川市酸性农作物土壤为研究对象,应用Illumina MiSeq高通量测序技术,测定酸性土壤中总细菌和经驯化的可培养细菌的16S rRNA基因V3~V4变异区序列,确定不同农作物土壤中总细菌和可培养细菌的群落结构,并探讨土壤理化因子对土壤总细菌群落结构的影响.结果表明:白菜地、烟草地、山药地、草莓地、玉米地及莴苣地这6种农作物土壤中总细菌和可培养细菌在97%的相似水平下得到的OTUs(operational taxonomic units,操作分类单元)数量分别为4 008和97个.在门水平上,土壤总细菌中有12个门类的细菌相对丰度大于1%,Proteobacteria、Acidobacteria和Chloroflexi为优势菌门细菌;可培养细菌中仅有3个门类细菌相对丰度高于1%,即Firmicutes、Proteobacteria和Bacteroidetes.在OTU水平上,土壤总细菌沿pH梯度将6种土壤样品分为2类,即pH<5.5的玉米地、山药地和莴苣地和pH>5.5的烟草地、白菜地和草莓地.此外,冗余分析(RDA)结果显示,Acidobacteria的相对丰度与pH呈正相关,Firmicutes和Roteobacter的相对丰度均与w(TN)、w(TP)、w(TC)呈正相关.系统进化树分析表明,相对丰度位于前30位的细菌与亚洲地区发现细菌的16S rRNA基因序列同源性较高.研究显示,Illumina MiSeq测序能够较为全面地解析酸性土壤中总细菌和可培养细菌的多样性,驯化过程极大地减少了细菌的种类;同时,发现细菌群落结构的相似性可能因样本来源的地理距离的增加而衰减.; 王怡常彬河刘月梁建军薛芷筠张泽文何冬兰; 关键词：酸性土壤细菌群落可培养细菌

β-甘露聚糖酶产生菌的分离鉴定和酶学性质被引量：15: 2011年; 从工厂废液中分离并筛选到了1株产β-甘露聚糖酶的菌株CYS4,其摇瓶培养液的酶活力为11.0U/mL。经形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应pH值为7.0,在pH值为5.0-11.0时能保持很好的稳定性,酶活力在80%以上;该酶的最适反应温度为60℃,在温度低于40℃时基本稳定,保温3 h酶活力仍然有70%以上;Na^＋、Fe^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Mg^2＋等金属离子对该酶有激活作用,Hg2＋对酶活有一定的抑制作用。; 李长影孔雯王家昕高剑锋李晓华; 关键词：Β-甘露聚糖酶酶学性质

一株产纤维素酶菌株的筛选及酶学性质被引量：3: 2012年; 以羧甲基纤维素钠为惟一碳源,从土壤中筛选出一株产纤维素酶的菌株XW-13,其摇瓶培养液的CMC酶活力为15.05μg/mL,滤纸酶活力为15.13μg/mL。酶学性质试验表明,该酶的最适反应pH 7.0,在pH 5.0～9.0时有较好的稳定性,酶活力保持60%以上。该酶的最适反应温度为40℃,在温度为20℃时基本稳定,保温2 h仍有80%以上的活力。在化合物浓度为0.2 mg/mL的条件下,NH4+、Na+、Fe2+、K+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+和Li+对酶活力有增进作用,Hg+和Cu2+对酶活力有抑制作用。; 高剑锋李文鑫李汇龙耿旭梅谭晖郭佳李晓华; 关键词：酶学性质

中间苍白杆菌尼古丁降解相关基因ocnH的克隆及功能分析: 2023年; 通过PCR扩增获得中间苍白杆菌SCUEC4菌株中与尼古丁降解相关的ocnH基因,构建重组质粒pET28a(+)-ocnH,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行异源表达,并对表达条件进行优化,用高效液相色谱法测定重组表达菌株的马来酸异构酶活性.结果表明:ocnH基因大小为585 bp,编码蛋白分子量约为20.6 kDa.重组表达菌株在IPTG浓度为0.6 mmol·L^(-1)、诱导温度为25℃、诱导表达时间为20 h时,OcnH蛋白的表达量较高.转入pET28a(+)-ocnH的大肠杆菌BL21(DE3)菌株具有将马来酸转化为富马酸的功能.; 王萌蕾许倍滔夏珍珍王力张建国李晓华; 关键词：功能分析

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