安徽省年度重点科研项目(11070303024)
- 作品数：5 被引量：30H指数：3
- 相关作者：王桂军殷冬冬王楠楠刘光清王瑞更多>>
- 相关机构：安徽农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：安徽省年度重点科研项目安徽省教育厅重点科研项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 目的用RT-PCR技术扩增鸭坦布苏病毒(DTMUV)AH-F10株E基因,并克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒pET32a-E,表达E蛋白。方法重组表达质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,获得含6个His标签的融合蛋白,大小约54kDa。表达的蛋白以包涵体形式存在。对目的蛋白进行纯化,用纯化的E蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体血清。结果SDS-PAGE和Western blot试验结果表明E基因在大肠埃希菌中成功表达,并能与抗DTMUV多克隆抗体产生特异性反应,具有良好的反应原性。间接免疫荧光试验表明免疫小鼠后获得的多克隆抗体能与DTMUV反应。结论本研究为DTMUV新型疫苗和诊断试剂盒的进一步研究奠定了基础。
- 王勇殷冬冬宫晓华王瑞许漩唐井玉兰梦蝶王桂军
- 关键词：E蛋白原核表达多克隆抗体
- 鸭坦布苏病毒AH-F10株全基因组的分子克隆与序列分析
- 为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征及构建该病毒的感染性克隆,本文利用RT-PCR方法对其全基因组序列进行了测定,并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果表明,AH-F10...
- 王蓓王楠楠毕庄莉王晓旭李传峰朱良强刘光清王桂军
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 副鸡嗜血杆菌的分离与鉴定被引量：2
- 2012年
- [目的]对1例鸡传染性鼻炎疑似病例进行病原菌的分离与鉴定。[方法]从安徽省某鸡场发生的以脸面肿胀、流泪和产蛋下降为临床特征的病鸡上呼吸道分泌物中分离细菌,并进行染色、镜检、菌落形态观察,并利用"卫星现象"和PCR等方法进行鉴定。[结果]成功分离到1株副鸡嗜血杆菌,经鉴定为C型副鸡嗜血杆菌。动物回归试验表明,该分离株能引起典型的鸡传染性鼻炎,对鸡具有较强的致病力。[结论]该研究可为鸡传染性鼻炎的预防与控制提供依据。
- 张洪辉王汉清王蓓李宁曹守林倪欣涛王桂军
- 关键词：副鸡嗜血杆菌PCR传染性鼻炎
- 鸭坦布苏病毒AH-F10株全基因组的分子克隆与序列分析被引量：8
- 2014年
- 为了解鸭坦布苏病毒安徽分离株AH-F10的分子特征，利用RT—PCR方法对其全基因组序列进行了克隆，并将全基因组及其推导的氨基酸序列与参考毒株进行序列比对及系统进化分析。结果显示，毒株AH—F10的全基因组序列长10990nt，含有1个大的阅读框架，两侧各有一个非编码区（Untranslationregion，UTR）。序列比对结果表明，AH—F10株与13株参考毒株的基因编码区具有较高的氨基酸序列同源性，其中与江苏JS20LO株的同源性最高，达98％。研究还发现，鸭坦布苏病毒各分离株的5IUTR的序列表现一定程度的变异，AH—F10株与参考株的核苷酸序列同源性在94％～97％之间。此研究结果为进一步了解鸭坦布苏病毒的遗传变异及构建该病毒的反向遗传学操作系统奠定了基础。
- 王楠楠姜安安王蓓王晓旭毕庄莉唐井玉刘光清王桂军
- 关键词：全基因组
- 坦布苏病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：8
- 2015年
- 为建立检测坦布苏病毒的SYBR GreenⅠ绝对荧光定量RT-PCR,针对坦布苏病毒E基因设计1对特异性引物,用PCR扩增E基因后将其连接到pMD19-T载体上构建重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板绘制了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,经反应条件优化后,绘制的SYBR GreenⅠ绝对荧光定量RT-PCR的标准曲线的线性关系显著(r2>0.999),平均试验间变异系数为0.26%;检测敏感性可达到2×101 copies/μL。应用该方法对人工感染坦布苏病毒的鸭组织进行的检测结果显示,从36份病料组织中检出35份为阳性,检出率为97%。结果表明,成功建立了检测坦布苏病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,该方法较常规PCR更快捷、敏感、准确,适用于坦布苏病毒临床样品的检测。
- 王楠楠刘芳许漩张世伟聂睿殷冬冬刘光清王桂军
- 关键词：SYBRE基因
- 新型鸭源细小病毒安徽株AH-D15株的分离鉴定被引量：12
- 2016年
- 为确定安徽省某鸭场发生的以雏鸭发育迟缓、鸭喙萎缩、舌头外伸下弯为特征的疾病病因,本研究利用PCR对病鸭样品进行检测,结果扩增出鹅细小病毒(GPV)特异性目的片段。将PCR阳性病料组织样品接种11日龄樱桃谷鸭胚,盲传3代后,可致鸭胚胚体出血严重,并且鸭喙畸形,证实分离到一株鸭源细小病毒(命名为AH-D15株)。利用第3代尿囊液感染2日龄健康樱桃谷肉鸭,2周后感染鸭出现短喙症状,并从鸭脑、肾、脾、胰腺和肝脏组织内检测到病毒。将分离病毒株的VP3核苷酸序列与Gen Bank中登录的GPV和番鸭细小病毒进行比对,结果表明AH-D15株与德国的VG32/1株和匈牙利的virulent B株亲缘关系最近,同源性分别为96.3%和96.5%。上述结果表明从病鸭体内分离到的鸭细小病毒可能来源于GPV,因此为该病的防控提供实验依据。
- 殷冬冬唐井玉王瑞周晓雅张莉陈鹏张雪梅梅楠祁克宗王勇王桂军
- 关键词：樱桃谷鸭
