国家自然科学基金(30770652)
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
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- Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞系的差异表达蛋白质组分析
- 2008年
- 目的:研究PTEN缺失细胞的蛋白表达规律。方法:用双向电泳技术比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs细胞的蛋白表达差异;用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白进行质谱分析;用肽质量指纹图谱检索数据库对差异蛋白进行鉴定;用Northern印迹和Western印迹验证蛋白的差异表达。结果:与Pten+/+MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞有明显的差异性蛋白表达谱,Pten-/-MEFs细胞中表达下降的蛋白有铜锌超氧化物歧化酶、过氧化物氧化还原酶5和6等,表达增加的蛋白有低分子量蛋白酪氨酸磷酸酶和丝切蛋白(coffilin)1。结论:PTEN的缺失引起细胞内多种蛋白表达改变,这些表达改变的蛋白可能与PTEN缺失后细胞癌变相关。
- 段瑞峰傅春玲李刚杨柳胡迎春吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN双向电泳
- Pten缺失小鼠胚胎成纤维细胞中活性氧和氧化损伤水平的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究Pten缺失后小鼠胚胎成纤维细胞抗氧化能力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、脂质以及DNA氧化损伤水平的变化。方法:采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力检测、ROS荧光发光分析、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测和.γ-H2AX免疫荧光染色技术,分别比较Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞SOD活力、ROS、MDA和γ-H2AX水平的差异。结果:Pten^(-/-)MEFs细胞中SOD活力明显减弱,ROS、MDA和γ-H2AX水平均显著增高。结论:Pten可能通过调控细胞抗氧化能力影响ROS水平,从而拮抗脂质和DNA氧化损伤以及由此产生的染色体不稳定性。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN活性氧染色体缺失脂质过氧化作用DNA氧化损伤成纤维细胞
- Pten基因对小鼠胚胎成纤维细胞中Cu／Zn-SOD基因表达的调控被引量：2
- 2009年
- 目的研究Pten基因对抗氧化蛋白Cu/Zn-SOD基因表达的调控,初步探索其调控机制。方法运用North-ern blot比较Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中基础Cu/Zn-SOD mRNA表达差异,以及0.1mmol/LH2O2诱导后Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中Cu/Zn-SOD mRNA表达差异;运用Western blot分析PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用Pten-/- MEFs细胞不同时间(30min,1、2、6、24h)后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,磷酸化AKT及Cu/Zn-SOD蛋白表达变化;利用Northern blot分析LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min,1、2、6、24h后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,Cu/Zn-SOD mRNA表达变化。结果Pten-/- MEFs细胞中,基础Cu/Zn-SOD mRNA表达水平降低,H2O2诱导的Cu/Zn-SOD mRNA表达明显受到抑制;在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,AKT磷酸化水平明显降低,2h时基本没有表达;与此对应,在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA表达均增强,并持续增强至24h。结论小鼠胚胎成纤维细胞中,Pten基因可通过拮抗PI3K/AKT信号通路调控Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA的表达。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN超氧化物歧化酶AKT信号通路
- Pten^(L/L)MEFs与Pten^(△/△)MEFs细胞系的差异表达蛋白质组分析
- 2008年
- 目的研究PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异。方法运用双向电泳技术比较PtenL/LMEFs与Pten△/△MEFs细胞的蛋白表达差异,6个差异蛋白进行胶内酶切后运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行质谱分析,肽质量指纹图谱检索数据库后5个蛋白得到鉴定。结果同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglycerate mutase 1,PGAM1)和肽脯氨酰顺反异构酶C(pepti-dyl-prolyl cis-trans isomerase C,cyclophilin C)在Pten△/△MEFs细胞中表达上调而Transgelin 2蛋白在Pten△/△MEFs细胞中表达下调。经鉴定已知蛋白点B和F都是过氧化物氧化还原酶6(Peroxiredoxin-6),蛋白点B在Pten△/△MEFs细胞中表达而在Pten△/△MEFs细胞中检测不到,蛋白点B和F的分子质量相似而等电点不同,可能是由于翻译后修饰。结论同对照PTEN野生型细胞PtenL/LMEFs相比,PTEN缺失的Pten△/△MEFs细胞有明显的差异性蛋白表达谱。PTEN的缺失引起细胞内多种蛋白表达改变,这些表达改变的蛋白可能与PTEN缺失后细胞癌变相关。
- 段瑞峰李刚胡迎春吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN双向电泳肽质量指纹图谱
- PTEN再表达对细胞内抗氧化蛋白表达和DNA氧化损伤的影响被引量：2
- 2010年
- 目的研究10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源体(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)再表达对细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达、活性氧(ROS)和DNA氧化损伤水平及细胞抗氧化能力的影响。方法采用Western blot法比较Pten-/-MEFs细胞(对照细胞)与PTEN再表达的Pten-/-MEFs细胞内抗氧化蛋白Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD的表达差异;采用化学/荧光发光法分析对照细胞与PTEN再表达细胞内基础ROS水平差异;采用中性单细胞凝胶电泳比较不同浓度(0、0.01、0.05、0.10mmol/L)H2O2处理后,对照细胞与PTEN再表达细胞内DNA双链断裂(DSBs)的变化。结果与对照细胞相比,PTEN再表达细胞中Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD蛋白的表达水平增高,细胞内基础ROS水平降低,DSBs减少,细胞抵抗外源性H2O2的能力增强。结论 PTEN可能通过对Prdx1,2,5,6和Cu/Zn SOD等抗氧化蛋白的表达调控,增强细胞抗氧化能力,清除细胞内过量的ROS,从而保护细胞免受氧化压力导致的DNA氧化损伤,维持基因组稳定性。
- 周乔丹米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：再表达活性氧DNA氧化损伤
- 多效生长因子对Schlafen3和Schlafen4基因表达的负调控作用
- 2010年
- 目的研究多效生长因子(Pleiotrophin,PTN)对Schlafen3(Slfn3)和Schlafen4(Slfn4)基因表达的负调控作用。方法采用RT-PCR和Northern blot法检测对照细胞(表达Ptn的Pten-/-小鼠胚胎成纤维细胞)与Ptn-/-细胞(Ptn表达沉默的Pten-/-小鼠胚胎成纤维细胞)中Slfn3/Slfn4基因的表达;分析人脑胶质瘤U87MG细胞和人乳腺癌MDA-MB-231细胞中Ptn与Slfn3/Slfn4基因表达水平的关系;在Ptn-/-细胞培养液中加入50ng/mlPTN,检测Slfn3/Slfn4基因的表达;用Ptn-/-细胞培养液作用对照细胞后,检测Slf3/Slf4基因的表达。结果 Ptn-/-细胞中Slfn3/Slfn4基因高表达;在U87MG和MDA-MB-231细胞中,Ptn与Slfn3/Slfn4基因的表达呈负相关;在Ptn-/-细胞培养液中加入PTN后,Slfn3/Slfn4基因的表达受到抑制;Ptn-/-细胞培养液对Slfn3/Slfn4基因的表达具有诱导作用。结论 PTN对Slfn3/Slfn4基因的表达具有负调控作用。
- 周乔丹米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基因表达调控
- PTEN在维护基因组稳定性中的作用被引量：2
- 2008年
- 最新研究发现,具有磷酸酶活性的肿瘤抑制基因pten在维持染色质和基因组稳定性方面起着重要的作用。PTEN可以磷酸酶依赖型和非依赖型两种方式维护基因组的稳定性。PTEN的磷酸酶依赖型调控机制主要通过PI3K/AKT通路;PTEN的磷酸酶非依赖型调控机制主要通过蛋白质的相互作用;此外还存在一些未知的途径。
- 陈忠民霍艳英吴德昌
- 关键词：PTEN基因组不稳定性
