重庆市自然科学基金(cstc2012jjA10120)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 骨形态发生蛋白9、6双表达腺病毒载体的构建及其成骨诱导作用被引量：3
- 2013年
- 目的构建双表达骨形态发生蛋白(BMP)9、6重组腺病毒并探讨其对C3H10细胞成骨的影响。方法以单一表达的BMP9或BMP6 AdEasy质粒为模板,PCR自扩增BMP9和BMP6基因序列,先后将其插入穿梭质粒pASG2,获得双表达穿梭质粒pASG2-BMP9、6,然后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183中同源重组,酶切鉴定成功后,转染至HEK293细胞中包装和扩增得到高滴度双表达腺病毒AdBMP9、6,体外转染C3H10细胞,RT-PCR方法检测BMP9、BMP6 mRNA水平的表达,早期成骨指标碱性磷酸酶染色、晚期指标钙茜素红染色检测其成骨作用。结果成功构建双表达重组腺病毒AdBMP9、6,RT-PCR证实双表达腺病毒能成功转染C3H10细胞,并且转染的C3H10细胞早晚期成骨指标碱性磷酸酶染色及钙茜素红染色活性较单一表达BMP9或BMP6的腺病毒组均增强。结论双表达重组腺病毒载体AdBMP9、6具有定向诱导C3H10细胞成骨分化的能力,且较单一表达BMP9或BMP6强。
- 迭小红罗庆陈聪罗光金康权
- 关键词：重组腺病毒成骨
- siRNA沉默Id1基因对小鼠骨肉瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响被引量：5
- 2015年
- 目的 探究沉默分化抑制因子1 （Id1）表达对小鼠骨肉瘤（K7M2-WT）增殖、迁移及凋亡的影响及可能的分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的靶点.方法 实验分3组,空白对照组（Control组）,细胞未做任何处理；siRNA组重组腺病毒组（AdsiRNA组）,用带表达红色荧光蛋白基因的空载体腺病毒感染细胞；simId1重组腺病毒组（AdsimId1组）,特异性针对小鼠Id1基因的小干扰RNA重组腺病毒感染细胞.按分组分别处理K7M2-WT,用RT-PCR、Western bolt检测Id1的mRNA水平及蛋白水平表达,MTT法检测细胞增殖,划痕试验、Transwell检测细胞迁移能力,DAPI染色检测凋亡.结果 AdsimId1感染K7M2-WT 3d能沉默骨肉瘤细胞Id1基因mRNA及蛋白水平的表达.MTT显示Control组、AdsiRNA组和AdsimId1组OD值分别为0.520±0.032、0.490±0.010、0.220±0.006.沉默Id1基因抑制K7M2-WT细胞的增殖,相对Control组及AdsiRNA组抑制率分别为58％和55％（P＜O.05）.细胞划痕实验结果提示AdsimId1组细胞的迁移较Control组、AdsiRNA组减慢.Transwell实验结果：AdsimId1组的穿膜细胞数为（44.7±3.7）个,显著少于Control组（100.3±3.8）个及AdsiRNA组（103.8±4.4）个（P＜0.05）.AdsimId1组细胞凋亡较Control组、AdsiRNA组明显.结论 沉默Id1基因使骨肉瘤细胞增殖和迁移能力减弱,增强骨肉瘤细胞的凋亡,为骨肉瘤治疗提供新的靶点.
- 迭小红罗庆毕杨罗光金仇超刘敏康权
- 关键词：骨肉瘤细胞增殖细胞凋亡
