重庆市自然科学基金(2007BB5079)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：孙雯雯刘丁王政陈萍张莉萍更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆医科大学附属第一医院第三军医大学第三附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠Dectin-1胞外区的融合表达及其识别白念珠菌β-葡聚糖的研究被引量：2
- 2010年
- 目的克隆、表达并纯化小鼠腹腔巨噬细胞Dectin-1基因胞外区，探讨其识别并结合真菌β-葡聚糖的能力。方法应用RT-PCR方法从小鼠腹腔巨噬细胞RNA中扩增Dectin-1基因胞外区，构建原核重组表达载体pET28-CRD，进行融合表达、纯化和复性。将融合蛋白与白念珠菌酵母相共同孵育，检测其识别、结合白念珠菌细胞壁β-葡聚糖的功能。结果成功克隆并构建原核重组表达质粒pET28-CRD，表达并纯化了融合蛋白，该蛋白能识别、结合白念珠菌酵母细胞壁β-葡聚糖。结论构建的原核重组表达载体能够在原核细胞内表达，表达产物有识别、结合真菌胞壁β-葡聚糖的功能，为进一步研究相应的真菌检测方法奠定了基础。
- 刘丁孙雯雯陈萍王政
- 关键词：DECTIN-1Β-葡聚糖白念珠菌
- Dectin-1融合蛋白真核表达载体的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建小鼠Dectin-1融合蛋白真核表达质粒并进行真核表达初步研究。方法运用RT-PCR技术扩增小鼠腹腔巨噬细胞Dectin-1基因的细胞外碳水化合物识别域(CRD),与真核表达载体pSecTag2C进行双酶切之后进行连接反应,构建重组融合表达载体,转染入293细胞中,目的蛋白在细胞培养基中分泌表达,表达产物经蛋白浓缩、纯化后经SDS-PAGE、Western印迹鉴定。结果获得重组真核表达载体pSecTag2C-Dectin-1,测序结果证明质粒DNA序列完全正确,并在转染入293细胞后检测到目的蛋白的表达。结论成功构建重组真核表达载体pSecTag2C-Dectin-1,为进一步纯化蛋白研究真菌检测方法及Dectin-1与真菌相互作用机制、功能等奠定了基础。
- 孙雯雯刘丁张莉萍
- 关键词：真菌融合蛋白真核表达
- 侵袭性真菌感染的实验诊断研究
- 2010年
- 随着抗菌药物、免疫抑制剂及皮质类固醇激素的应用，器官移植、侵入性操作的广泛开展，临床上真菌感染逐年增多，尤其在免疫力低下和危重患者中，侵袭性真菌感染已成为主要并发症，其发病率和死亡率居高不下，严重威胁着患者的生命。通常侵袭性真菌感染的早期诊断比较困难，一方面因为真菌感染早期无特异的临床表现；另外，目前临床常用的培养鉴定方法难以满足早期诊断的要求。
- 孙雯雯刘丁张莉萍
- 关键词：真菌侵袭性真菌感染
- 重症监护室内真菌感染患者血浆(1-3)-β-D葡聚糖检测的调查被引量：1
- 2011年
- 目的对真菌感染快速诊断方法进行评价。方法血培养同时,用动态显色LAL法(KCA-LAL法)检测(1-3)-β-D葡聚糖(BG)。对比同类型试剂的专一性,再测试干扰物的影响。结果 15例血培养真菌阳性患者中,12例(80.0%)为阳性,阴性2例(13.3%),不确定1例(6.7%),BG检测平均值为(475.9±51.7)pg/ml;敏感性为63.83%,特异性为84.62%,阳性预测值为96.26%,阴性预测值为39.29%。结论 BG实验快速且特异性好,但由于影响因素多,敏感性还有待提高。
- 王豪刘丁陈萍成瑶王政
- 关键词：重症监护室真菌感染血清学实验
- 真菌β-葡聚糖受体Dectin-1胞外识别区的克隆和原核表达
- 2010年
- 目的为探讨真菌β-葡聚糖受体胞外识别区相关基因的分子功能,对小鼠巨噬细胞上的Dectin-1基因进行克隆、原核表达及鉴定分析。方法以小鼠巨噬细胞总RNA为模板,用RT-PCR扩增其Dectin-1基因的细胞外糖识别域,并重组到原核表达载体pET28a(+)中,转入E.coli BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测分析鉴定。结果阳性重组质粒经Nde I和Xho I双酶切得到552 bp和5 369 bp两条片段。重组质粒测序,与GenBank上的相应序列比对完全一致,且输入片段读码框与表达载体读码框吻合。SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量为22 000;Westernblot检测出特异性阳性信号。该蛋白可识别、绑定酵母多糖。结论本研究成功构建了真菌β-葡聚糖受体胞外识别区基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达相应的蛋白,为进一步探讨该基因在真菌识别中的功能奠定了基础。
- 孙雯雯刘丁王政陈萍王豪成瑶
- 关键词：真菌Β-葡聚糖蛋白表达DECTIN-1
