国家科技支撑计划(2006BAK02A08-13)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备研究被引量：5
- 2011年
- 将去氢甲睾酮多克隆抗体同CNBr-Sepharose4B进行偶联,制成了对去氢甲睾酮具有特异性吸附的免疫亲和柱(IAC),优化了免疫亲和柱的制备和使用条件;同时用间接竞争ELISA(icELISA)和高效液相色谱法(HPLC)对该免疫亲和柱的性能进行评价。结果表明:CNBr-Sepharose4B偶联抗体的最佳反应时间为2.5h,抗体最佳初始质量浓度为0.5mg/mL;IAC的柱容量约为1700ng DMT/g干胶;最适洗脱条件为80%的甲醇-水溶液,平均加标回收率为97.87%。该亲和柱重复使用3次,回收率仍不低于90%。
- 徐燕王云张勋伍娟董英
- 关键词：免疫亲和柱间接竞争ELISAHPLC
- 去氢甲睾酮抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的：制备兔抗去氢甲睾酮（DMT）抗体，为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法：采用碳二亚胺法将肟化后的DMT分别偶联到钥孔血蓝蛋白、鸡卵清蛋白和牛血清白蛋白蛋白载体上，制备完全抗原，并利用薄层层析法、红外和紫外光谱法对其进行确证后，免疫新西兰大白兔；通过间接ELISA法测定和比较2种兔抗血清的效价、IC50及交叉反应率。结果：成功制备了DMT的完全抗原，其抗体效价分别为1：64000（KLH—DMT）和1：256000（OVA—DMT），IC50值分别为0．24ug／L和5.29ug／L；抗血清与丙酸睾酮酯、群勃龙的IC50值均大于781．25ug／L。结论：制备的DMT完全抗原具有较高的免疫原性，抗体与类似物丙酸睾酮酯、群勃龙无明显的交叉反应，可用于ELISA实验。
- 张勋董英王云朱帜
- 关键词：ELISA多克隆抗体免疫原性
- 去氢甲睾酮单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定。结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87mg/mL,效价为1∶32000,IC50值为7.57μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%,猪肉样品中平均加标回收率为97.73%。结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础。
- 张勋董英王云徐燕
- 关键词：单克隆抗体
