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汉坦病毒部分S基因在毕赤酵母中的分泌表达: 2009年; 目的构建并表达汉坦病毒（HV）Z10株（HV-Z10）S基因蛋白编码区前300bp核苷酸序列，研究该基因在毕赤酵母（Pichia pastoris）中的表达及其产物的生物活性。方法根据HV-Z10 S基因前300bp（S300）的核苷酸序列，按照编码氨基酸的密码子转换成酵母偏爱的形式，设计合成8条引物，通过连续PCR，获得人工合成Z10株S基因前300bp的基因序列SP300，经测序，SP300与S300的核苷酸相似性为76.2％，但编码的氨基酸序列完全一致。将SP300克隆到酵母穿梭载体pPICZaA，构建含α-factor分沁信号肽的重组表达载体pPICZaA-SP300。将pPICZaA-SP300、pPICZaA-S300化学法转化酵母GS115菌株，筛选重组转化子。结果重组了SP300与S300的酵母转化子经甲醇诱导，表达出重组蛋白rNP300及rN300，SDS-PAGE显示相对分子质量为12×10^3左右。经ELISA检测及Western Blot分析，表达产物能与抗汉坦病毒抗体起免疫反应。结论SP300和S300基因在毕赤酵母中获得分泌表达，使用酵母偏爱密码子的SP300基因在毕赤酵母中的表达量与S300的表达量基本一致，表达量在诱导24h后最高。; 朱函坪姚苹苹邓小昭徐芳谢荣辉朱智勇张云; 关键词：汉坦病毒属基因基因表达毕赤酵母

汉坦病毒浙江分离株的基因分型被引量：1: 2012年; 目的对浙江省汉坦病毒（HV）分离株进行基因分型，为制定肾综合征出血热防制对策提供科学依据。方法应用RT—PCR的方法，使用汉坦病毒型特异性引物，对汉坦病毒浙江分离株型特异性M和S片段进行扩增和测序，并与其他已知病毒序列进行比较，以明确浙江株的基因型和亚型。结果本研究中18株HV浙江株11株为汉滩型（HTN），分为5个亚型，另7株为汉城型（SEO），分为3个亚型。HTNV ZNB-1、ZNB-2毒株和A3毒株以及SEOV Gou3、ZJ5毒株在种系发生上与其他HTNV和SEOV明显不同，Gou3和ZJ5株在SEOV发生群中构成一独立分支，比较核苷酸序列发现，ZNB-1和ZNB-2病毒M片段除与HTNV Nc167株有较高的同源性外（88．7％），与其他HTNV的同源性在69．7％-74．0％之间，A3株M片段除与HTNV B78株有较高的同源性外（99．7％），与其他HTNV的同源性在73．6％～76．3％之间。结论浙江省是汉坦病毒中汉滩型和汉城型的混合型疫区，HTNV至少有5个亚型，SEOV至少有3个亚型，而且浙江省存在着特殊亚型的HTN毒株以及SEO毒株。; 徐芳姚苹苹朱函坪王洁钱磊胡群童淑梅邓小昭谢荣辉杨章女张云朱智勇; 关键词：汉坦病毒基因型

量子点荧光探针用于汉坦病毒重组抗原的检测被引量：4: 2012年; 目的应用量子点荧光探针对汉坦病毒(Hantavirus,HV)重组抗原进行检测。方法合成水溶性量子点荧光纳米颗粒,并在其表面修饰G蛋白和anti-HV抗体作为量子点荧光探针,对HV重组抗原进行检测并优化检测条件。结果量子点与抗体的最佳偶联条件:pH 6.0、反应时间2 h、抗体浓度为20μg/ml。用本方法检测HV重组抗原的最低检测值为5 ng/ml。结论该探针能有效的识别HV抗原,且操作简便快速,为HV重组抗原的检测和肾出血热综合征的诊断提供了新方法。; 陈琼郑锦峰孙军红姚苹苹王洁李晶邓小昭王长军朱函坪张云; 关键词：汉坦病毒重组抗原

浙江省2008-2011年啮齿动物中汉坦病毒的分离及鉴定被引量：8: 2013年; 目的分析浙江省肾综合征出血热(HFRS)疫区鼠形动物携带汉坦病毒状况及其型别。方法应用直接免疫荧光试验和RTPCR方法检测汉坦病毒抗原和核酸,阳性者用长爪沙鼠和VeroE6细胞进行病毒分离,对分离株的M片段基因进行序列测定和分析。结果 2008-2011年在浙江省HFRS疫区捕获的鼠形动物中以黑线姬鼠为优势鼠种;从该鼠鼠肺中共分离到6株汉坦病毒,序列分析表明分离株均为汉滩型汉坦病毒,其中Z521、524、534为H7亚型,TT-27、T-43、R88可能为新亚型;6株分离株之间的基因同源性较高,并与以往浙江省分离株具有较高同源性。结论 2008-2011年浙江省HFRS疫区鼠间存在汉滩型汉坦病毒流行。; 徐芳朱函坪姚苹苹胡丹张云谢荣辉杨章女钱磊朱进; 关键词：汉坦病毒病毒分离 M基因啮齿动物

沙畈乡肾综合征出血热控制效果分析被引量：1: 2014年; 目的：持续观察肾综合征出血热（HFRS）高发疫区的控制情况。方法收集金华市婺城区沙畈乡5个村HFRS疫情数据，对开展灭鼠防鼠、免疫接种等综合防控工作的效果进行分析评价。结果灭鼠前后进行鼠密度测定，室外鼠密度从6.00％（18/300）下降到1.70％（5/300）；室内鼠密度从7.00％（7/100）下降到4.81％（5/104）；1997年沙畈乡5个村发病率490.23/10万。对从事野外劳动的16～60岁农民实施疫苗接种，免疫覆盖率达51.86％，免疫阳转率为97.60％，1999—2013年仅1例未接种者发病。结论以疫苗接种为主，辅以灭鼠等防制措施，对HFRS高发疫区的控制效果满意。; 傅桂明朱匡纪凌锋姚立农龚震宇陈志毅楼妙芬徐芳杨章女方乐蔡剑朱函坪姚苹苹朱智勇; 关键词：肾综合征出血热疫苗

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浙江省自然科学基金(Y205749)