国家自然科学基金(81072677)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：军事医学科学院湖南农业大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学
- 2013年
- 目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。
- 刘雄张凤娇李享陈芳红房华丽王琴李涛王慧
- 关键词：细菌耐药KPC-2型碳青霉烯酶Β内酰胺类抗生素
- 超广谱β-内酰胺酶SHV-18的表达纯化及活性验证被引量：1
- 2013年
- 目的:产超广谱β-内酰胺酶是肠杆菌科细菌和肺炎克雷伯菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的重要机制,该类酶主要水解青霉素类、头孢菌素类以及单环酰胺类抗生素。自从1983年第一次有关β内酰胺酶的报道开始,至今已经发现超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的种类超过400种,其中SHV型是最常见的ESBLs类型之一。本研究主要探讨了超广谱β-内酰胺酶SHV-18的原核表达载体的构建、酶的纯化和活性验证。方法:利用肺炎克雷伯菌ATCC700603全基因组为模板,应用分子生物学技术钓取SHV-18基因,构建pET22b(+)-SHV-18表达质粒,经测序鉴定后,转化大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达并亲和纯化,进一步通过抗生素水解实验,检测其水解活性,测定其酶动力学参数。结果:成功构建了可以以裂解上清形式高效表达SHV-18的工程菌。通过亲和纯化最终获得纯度达到90%以上的β-内酰胺酶SHV-18。获得的SHV-18蛋白能够水解青霉素G、头孢拉定、头孢唑肟、头孢他啶、头孢吡肟等多个抗生素。结论:获得了对青霉素和头孢菌素类具有水解活性的超广谱β-内酰胺酶SHV-18,并对其酶动力学参数进行了检测。在实验室研究了β-内酰胺酶SHV-18对不同抗生素的水解特性,更加有利与指导临床抗生素的合理使用。
- 郭通刘雄刘传杰钱敏王琴李涛王慧
- 关键词：纯化酶动力学
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EspA和EspB蛋白的重组表达及其免疫效果
- 2013年
- 目的:通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7的EspA和EspB蛋白,并分析它们的免疫保护性。方法:采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增espA和espB基因,连接至pET-22b(+)载体上,转化至宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量,免疫小鼠分析其免疫保护性。结果:重组espA和espB基因片段的测序结果与GenBank中的相应基因序列完全一致,一致性均为100%;得到了纯度为95%以上的重组EspA和EspB蛋白,免疫小鼠所得到的抗体效价均为106。结论:重组EspA和EspB蛋白获得了可溶性表达,表达的蛋白具有良好的免疫保护性,为进一步制备疫苗奠定了基础。
- 韩燃李涛王琴房华丽罗森郭峰李崭王德慧李文平王慧
- 关键词：重组蛋白免疫效果
- EHEC的新型粘附因子研究进展被引量：6
- 2014年
- 肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.coli,EHEC)是一种重要的人畜共患病,世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC有多种血清型,其中毒力最强血清型是O157:H7。EHEC O157:H7感染除可使人发生常规腹泻外,还可在5%-10%的病例中引发严重并发症,甚至死亡。该菌是重要的食源性致病菌,危害严重,缺乏有效的防治手段,而抗生素治疗可能会加剧溶血性尿毒症(haemolutic uraemic syndrome,HUS)。由于以上特点EHEC O157:H7成为世界公共卫生问题,引起微生物学家和公共卫生工作者的广泛关注。目前,临床针对EHEC感染只是对症治疗和适当的抗菌治疗。粘附是EHEC感染宿主细胞的第一步,没有这一步,细菌和宿主肠道细胞之间不会发生任何的相互作用,而且对于许多病原菌来说,粘附具有宿主特异性。本文概述了EHEC的流行病学及粘附机理,并对近年在EHEC研究中的发现一些新型粘附因子和一些假设的定植因子的研究背景及作用机理作一综述。
- 韩燃房华丽郭峰廖鹏运李锐李文平
- 关键词：肠出血性大肠杆菌粘附因子粘附作用
