国家自然科学基金(31070139)
- 作品数：10 被引量：47H指数：4
- 相关作者：张志芳李轶女沈桂芳石美丽姚冉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院生物技术研究所徐州师范大学中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 叶绿体转化体系研究进展被引量：6
- 2012年
- 叶绿体转化具有表达效率高,安全性高,遗传稳定,以及多基因可以同时转化等特点。真核或原核的外源基因都能在叶绿体中进行成功表达,至少有20种植物成功的进行了叶绿体转化。叶绿体作为生物反应器具有广阔的应用前景。
- 王金辉李轶女倪丕冲王国增张志芳沈桂芳
- 关键词：叶绿体转化物种叶绿体生物反应器
- 除草剂抗性基因的研究进展被引量：6
- 2011年
- 概述了除草剂抗性基因的种类,主要来源以及抗除草剂基因的应用。并对新的抗除草剂基因的发掘、既有的抗除草剂基因的改良、除草剂抗性机理研究以及新的抗除草剂作物的培育等方面的进一步研究进行了探讨。
- 王国增李轶女张志芳沈桂芳
- 关键词：农作物除草剂抗性基因工程转基因
- α-淀粉酶基因amyP的原核表达及酶学性质初步分析被引量：1
- 2014年
- α-淀粉酶作为一种十分重要的酶制剂,目前工业上都是以微生物发酵法大规模生产的。从耐高温菌株Geobacillus.POT-5基因组中,用PCR的方法扩增得到该菌的α-淀粉酶基因,此基因被克隆、测序,并在原核Escherichia coli表达系统中进行表达,并对该重组酶的酶学性质进行初步的分析。
- 赵金海杨灵张志芳李轶女
- 关键词：Α-淀粉酶原核表达酶学性质
- 鸡α干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性测定被引量：3
- 2014年
- 鸡α干扰素在防御病毒感染及治疗病毒性疾病中起着重要的作用。旨在利用家蚕杆状病毒表达系统研制有活性的鸡α干扰素。首先对鸡α干扰素基因(ChIFN-α)进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,与ORF1629缺损的亲本病毒BmBcmid共转染,纯化重组病毒,再感染家蚕幼虫,收集蚕血淋巴以检测α干扰素基因的表达。Western blot分析结果显示,成功表达出分子量约为19 kD的鸡α干扰素。采用细胞病变抑制法在Vero-VSV*GFP系统中测定表达产物的抗病毒活性。所的表达的鸡α干扰素具有明显的抗病毒活性,活性不低于3.2×105 U/mL。利用杆状病毒载体系统成功地表达了具有抗病毒活性的鸡α干扰素的成熟蛋白,为开发廉价高效的鸡干扰素生物制剂奠定了物质基础。
- 李田田杨灵易咏竹沈桂芳张志芳李轶女
- 关键词：家蚕杆状病毒表达系统抗病毒活性
- α-淀粉酶基因amyP的原核表达及酶学性质分析
- 2014年
- α-淀粉酶作为一种十分重要的酶制剂,目前工业上都是以微生物发酵法大规模生产的。从耐高温菌株Geobacillus.sp.POT5基因组中,用PCR的方法扩增得到该菌的α-淀粉酶基因,此基因被克隆,测序并在原核Escherichia coli表达系统中进行表达,并对该重组酶的酶学性质进行初步分析。
- 赵金海杨灵张志芳李轶女
- 关键词：Α-淀粉酶原核表达酶学性质
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型DNA甲基化研究被引量：1
- 2012年
- 目的:检测斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型是否存在DNA甲基化。方法:选取SpltNPVⅡ的DNA聚合酶序列以及全序中其它三段序列,利用亚硫酸盐修饰直接测序法进行甲基化检测实验。结果:DNA聚合酶中共有246处CG,14处发生甲基化,全序中选取的三段序列只有一段发生3处甲基化。结论:实验表明,SpltNPVⅡ中存在DNA甲基化,其DNA聚合酶甲基化程度高于其它三段序列,且不同序列的甲基化程度不一样,这为以后该病毒的表观遗传学进一步研究奠定了基础。
- 石美丽姚冉李轶女潘沈元沈桂芳张志芳
- 关键词：DNA甲基化病毒
- 猪流行性腹泻病毒S基因片段的克隆及原核表达被引量：5
- 2012年
- 为研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus PEDV)S基因片段的原核表达产物是否具有抗原性,分析S基因抗原位点后,用PCR技术扩增S蛋白主要抗原区的核酸序列,经克隆后将目的片段连接到原核表达载体pET-28a(+)中,成功构建了重组质粒pET-28a-PEDV-Sp,其重组菌于37℃、0.5mmol/LIPTG诱导表达4h后进行SDS-PAGE分析,在分子质量约为29kDa处出现一新蛋白带,与预期相符。质谱鉴定表明,已成功表达了目的蛋白。纯化后的重组蛋白免疫兔制备多克隆抗体,抗体效价检测结果显示该蛋白具有良好的抗原性。该研究为猪流行性腹泻基因工程疫苗的研制奠定基础。
- 王树坤郎洪武李轶女陈晓春张志芳
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达质谱抗原性
- 农杆菌介导的植物遗传转化研究进展被引量：22
- 2011年
- 农杆菌介导的转基因方法是目前植物遗传转化的重要方法之一。本文从农杆菌转化原理、菌株比较及载体发展入手,系统讨论了植物转化受体对转化效率的影响,同时分别综述了农杆菌介导转化技术在双子叶和单子叶植物转化应用中的最新进展。
- 姚冉石美丽潘沈元沈桂芳张志芳
- 关键词：农杆菌
- 猪戊型肝炎病毒ORF2 C-端主要抗原区的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 为研究猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2C-端主要抗原区的原核表达产物是否具有抗原性,用PCR技术对猪戊型肝炎病毒ORF2C-端基因进行扩增,经克隆与序列分析,发现该基因片段编码289个氨基酸残基。将该目的片段连接到原核表达载体pET-28a(+)中,转化表达菌BL21(DE3),成功构建了重组质粒pET-HEV-ORF2-C,其重组菌于37℃、0.5mmol/L IPTG诱导表达4h后,菌体裂解物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为34ku处出现一新蛋白带,与预期的目的蛋白分子质量相符。质谱鉴定表明,成功地表达了HEV-ORF2C-端蛋白。Western-blot和抗体效价检测分析结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性。
- 杨标易咏竹张志芳柳纪省吴润
- 关键词：戊型肝炎病毒ORF2原核表达
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型分离株ORF63基因的序列特征及表达与启动子活性分析被引量：2
- 2012年
- 斜纹夜蛾核型多角体病毒Ⅱ型(SpltMNPVⅡ)分离株是繁殖率和毒力极强的新型病毒株,ORF63是该病毒分离株的一个功能未知基因。从SpltMNPVⅡ分离株基因组中克隆了ORF63。序列分析表明,该基因读码框为1 071 bp,编码356个氨基酸,蛋白质分子质量为41.3 kD;起始密码子ATG上游存在一个早期和晚期启动子基序,编码蛋白序列含有CNX、MutH等多种结构域。启动子活性和转录时相分析表明ORF63是一个早、晚期表达的基因,在病毒感染4 h和18 h时有2个转录峰,24 h以后转录水平略有下降,但总体趋于稳定。构建该基因的原核表达载体pET-28a-ORF63,并转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体,Western blot检测制备的多克隆抗体特异性较好,效价可达1∶3 200以上。由以上结果推测,SpltMNPVⅡ分离株的ORF63基因是一个早期和晚期均有表达的病毒基因,可能与SpltMNPVⅡ感染宿主细胞后自身DNA的复制有关,参与早期芽生病毒(BV)的发生和晚期包涵体衍生病毒(ODV)的成熟2个过程。
- 刘惠芬高绘菊王石宝江峰李轶女张志芳牟志美
- 关键词：原核表达多克隆抗体
