浙江省科技计划项目(2010C33137)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：王晓明许林海孟群聂良明孙高忠更多>>
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- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省科技厅公益技术研究社会发展项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 两个部位脂肪来源干细胞的心肌细胞分化潜能比较被引量：2
- 2011年
- 目的比较心包部位和腹股沟部位脂肪组织来源干细胞(ADSC)的免疫表型和分化潜能。方法取Wistar大鼠心包组织和腹股沟脂肪,消化分离原代ADSC,分别用流式细胞技术和免疫组织化学法检测两个部位ADSC的免疫表型和心肌源性转录因子的表达,并进一步用5-氮杂胞苷分别诱导两个部位的ADSC向心肌细胞分化,分析诱导后心脏肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果两个部位的ADSC具有相同的免疫表型:均为CD29、CD44、CD90阳性和CD34、CD45阴性细胞。原代心包部位的ADSC可以检测到少量cTnT阳性细胞,并有不同程度的GATA-4、Isl-1、Nkx-2.5和MEF-2c表达;而原代腹股沟部位的ADSC除了Isl-1呈弱阳性表达外,其他因子均为阴性表达。两个部位的ADSC经诱导均定向分化成心肌细胞,但心包部位的ADSC的心肌分化能力大于腹股沟部位的ADSC(53%与32%,P<0.01)。结论不同部位的ADSC有共同的形态和免疫表型。心包部位的ADSC在转录因子和cTnT表达方面体现出较强的心肌分化潜能。
- 王晓明聂良明许林海
- 关键词：心包脂肪组织来源干细胞心肌分化
- 大鼠心包膜组织对其缺血心肌的保护和再生作用被引量：6
- 2011年
- 目的研究心包膜组织中是否有干细胞现象，能否对梗死后的心肌起到保护和修复作用。方法结扎Wistar大鼠冠状动脉左前降支（LAD）制作心肌梗死（简称心梗）模型。术中分别保留完整心包组织（＋PC组，n=8）和去除心包组织（-PC组，n=10）。心梗7d以后用超声心动图分析大鼠的心功能恢复情况；2，3，5．氯化三苯基四氮唑（ITC）染色测定梗死区的成活心肌组织；溴脱氧尿苷（BrdU）掺人实验检测新生的心肌细胞；免疫组化检测心包膜组织中心脏干细胞特征蛋白的免疫表象（SCA-1，c-kit和KDR）。结果超声心动图分析结果显示，＋PC组左室射血分数、左室短轴缩短率均高于-PC组（52±12比37±12，36±14比25±13，均P〈0．05）。TTC染色发现，心包组的再生心肌组织明显多于无心包组，这些细胞〉90％为BrdU阳性心肌细胞（新生细胞）。免疫组化显示：心外膜和心包膜组织中存在大量的Ki67阳性的分裂活跃细胞。心外膜和心包膜组织中的SCA-1和c-kit阳性细胞少，主要为KDR（flk-1）的阳性细胞，这些细胞呈克隆样增生，同一区域同时存在大量的cTnT阳性细胞，并发现部分KDR阳性细胞向心肌组织中迁移，提示这些心包起源的细胞可能参与了心脏的修复过程。结论心包膜组织在心脏自我修复过程中能起重要作用，其主要机制可能与心包膜KDR阳性心脏干细胞有关。
- 王晓明许林海孙高忠孟群
- 关键词：心包心肌梗死血管内皮生长因子受体2干细胞
- 大鼠心包膜组织KDR阳性细胞诱导成心肌细胞的研究被引量：1
- 2012年
- 目的 研究大鼠心包膜组织干细胞中分离、纯化血管内皮生长因子受体（KDR阳性）细胞的特性和心肌细胞的分化能力,为心包膜干细胞用于心脏细胞治疗提供理论依据.方法 取Wistar大鼠心包外脂肪,I型胶原酶消化法获取原代干细胞,培养并适时传代;然后分别用流式细胞仪和免疫组化方法检测分离细胞的免疫表象,并进一步用磁珠分离法分离出KDR阳性细胞,用5-氮杂胞苷诱导其向心肌细胞分化,分化后的细胞表型用免疫组化分析检测.结果 分离细胞成梭状,体外培养呈良好增长.FACS分析显示,这些细胞具有间充质干细胞的细胞特征,分别为CD29、CD44、CD90阳性,部分呈CD106阳性,CD34 和CD45阴性.免疫荧光染色显示,分离的干细胞为isl-1阴性,少量的c-kit、GATA-4阳性,约3%~5% 为KDR阳性细胞.磁珠分离法分离KDR阳性细胞,在药物诱导7d后,部分细胞聚集成细胞团,可见单个细胞开始自发性博动.免疫组化染色可以观测有心肌特异蛋白和结构蛋白的表达,并观察到明显的肌小节结构.结论 心包组织干细胞具有充间质干细胞的基本特征,并具有多样性的免疫表象,其中以KDR阳性细胞较多.纯化的KDR阳性细胞具有定向心肌细胞分化的潜能,提示其可以作为用于心脏细胞治疗的供体细胞来源之一.
- 王晓明许林海周冰孟群
- 关键词：心包血管内皮生长因子受体心肌细胞分化
- 大鼠心包膜组织WT1阳性细胞的分离、培养和生物学特性(附视频)被引量：2
- 2012年
- 目的了解大鼠心包膜组织中分离和培养干细胞的可行性、细胞特性和分化成心肌细胞的能力,为心包膜组织干细胞用于心脏疾病细胞治疗提供理论依据。方法取Wistar大鼠制备心肌梗死模型后取心包组织,胶原酶消化法分离心包膜组织干细胞,并进一步梯度离心纯化,培养并适时传代,测定其生长曲线;分别用流式细胞仪和免疫组织化学法检测分离细胞的免疫表型。用5-氮杂胞苷诱导心包膜组织干细胞向心肌细胞分化,分化后的细胞表型分别用免疫组织化学法和反转录PCR分析检测。结果分离细胞成梭状,体外培养呈良好增长,组织形态与心脏干细胞相似。免疫表型呈CD29、CD44、CD90阳性,部分呈CD106阳性,而CD34和CD45阴性;95%为WT1阳性细胞,并有少量的c-kit、心脏肌钙蛋白T、GATA-4、KDR阳性细胞。在药物诱导7d后,部分细胞聚集成细胞团,可见单个细胞开始自发性博动,可以观测到明显的肌小节结构,并同时有心源性转录因子和结构蛋白在转录水平表达。结论心包膜组织干细胞具有间充质干细胞的基本特征,并具有多样免疫表型,其中以WT1阳性细胞为主;纯化的WT1阳性细胞具有定向分化心肌细胞的潜能,提示心包膜组织可以作为心脏疾病细胞治疗的供体来源之一。
- 王晓明许林海聂良明孟群
- 关键词：心包WT1心肌细胞细胞分化视频
