国家自然科学基金(81072619)
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 相关作者：张纬萍韩雪黄鹏卢韵碧刘主更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江萧山医院中国科学院更多>>
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- 利用内源荧光筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂
- 2014年
- 目的：建立内源荧光检测筛选烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）抑制剂的方法.方法：以1,4-二马来酰亚胺基丁烷（BMB）交联G355 C/D393C双突变NAMPT,封堵其催化活性中心,以野生型及交联型NAMPT蛋白的自发荧光变化（280 nm激发波长,333 nm发射波长）检测化合物与蛋白的结合,以核磁共振方法体外检测化合物对NAMPT催化作用的影响,以MTT方法检测化合物对人肺癌A549细胞活性的影响.结果：FK866在0.1～1.0 μmol/L浓度范围内能浓度依赖地抑制野生型NAMPT自发荧光,但对交联型NAMPT的自发荧光没有影响.迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对两种蛋白自发荧光的抑制率无显著差异.FK866能够显著抑制NAMPT的催化作用,但迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对NAMPT的催化作用无抑制作用.FK866显著抑制A549细胞的活性,而迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸对A549细胞活性无抑制作用.结论：基于野生型和交联型NAMPT蛋白的内源性荧光检测法可以筛选与NAMPT蛋白结合的化合物,并分析化合物是否结合在NAMPT的催化活性部位,迷迭香酸、洋蓟素、1,3二咖啡奎宁酸可结合在NAMPT催化活性位点以外的部位.
- 韩雪董旭蒋文学黄鹏张纬萍唐淳
- 关键词：NAD酶抑制剂
- 水通道蛋白4基因敲除对老年小鼠行为和脑形态变化的影响
- 2013年
- 目的:观察AQP4基因敲除(AQP4-/-)对老年小鼠行为学和脑形态学变化的影响,揭示AQP4在脑老化中的作用。方法:58只CD-1小鼠按基因型与月龄分为4组:年轻(2～3个月龄)AQP4-/-组、老年(17～19个月龄)AQP4-/-组、年轻AQP4+/+组和老年AQP4+/+组。采用开场试验测定小鼠运动量和探究行为,脑切片进行神经元特异性染色(甲苯胺蓝染色、NeuN染色)、星形胶质细胞特异性染色(GFAP染色)和小胶质细胞特异性染色(Iba-1染色),观察并计数皮层和海马神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞的形态和数量。结果:与年轻小鼠比较,老年AQP4+/+和AQP4-/-小鼠在开场试验的总活动距离分别减少41.2%和44.1%(P<0.05),各组小鼠在中心区域的活动距离和滞留时间无差异;老年AQP4+/+和AQP4-/-小鼠皮层神经元密度分别降低19.6%和15.8%(P<0.05),各组间CA1区神经元胞体层厚度无差异;老年AQP4+/+和AQP4-/-小鼠海马CA3区星形胶质细胞密度分别增加57.7%和64.3%(P<0.001),各组间星形胶质细胞的总面积无显著差异;老年AQP4+/+和AQP4-/-小鼠海马CA3区小胶质细胞的面积分别增加46.9%和52.0%(P<0.01),各组间小胶质细胞密度无显著变化。与AQP4+/+小鼠相比,AQP4-/-小鼠在海马CA3区星形胶质细胞总面积明显减小,年轻小鼠减小18.0%(P<0.01),老年小鼠减小23.6%(P<0.01),其余指标均无显著差异。结论:AQP4可能影响小鼠星形胶质细胞形态及与星形胶质细胞相关的神经功能,对神经元、小胶质细胞的形态和部分相关神经行为无明显影响,AQP4基因敲除对小鼠脑老化过程发生的脑形态和神经行为变化无显著影响。
- 苏圣桉卢韵碧张纬萍
- 关键词：水通道蛋白4病理学小胶质细胞病理学星形胶质细胞病理学病理学
- 重组人NAMPT蛋白静脉注射对正常小鼠生理生化指标及脑结构的影响
- 2013年
- 目的:观察较长时期静脉注射尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)蛋白对正常小鼠多种生理生化指标及脑结构的影响。方法:32 d内每3天经尾静脉给正常小鼠注射重组野生型NAMPT蛋白或酶活性大大降低的H247A突变型NAMPT蛋白10、30、100μg/kg,检测其体重、血压、心率、血糖、血脂等生理生化指标,观察其脑内海马区神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞等的形态。结果:NAMPT野生型和突变型蛋白长期注射对正常小鼠体重、血压、心率、血糖、总胆固醇、甘油三酯等均无明显影响,对其海马CA1区神经、星形胶质细胞和小胶质细胞的形态和数量均未见显著改变。结论:血NAMPT增高可能不是正常个体代谢性疾病及神经系统功能障碍的诱发因素,独立的致病风险较低。
- 袁绮艺张纬萍
- 关键词：重组蛋白质类细胞学细胞学解剖学和组织学
- 尼克酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂的抗肿瘤作用研究进展被引量：1
- 2015年
- 尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)是哺乳动物细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)补救合成通路的限速酶。NAMPT通过合成NAD,参与调节细胞内重要的生理病理过程。近年研究发现,NAMPT与肿瘤发生、发展有着密切关系,抑制NAMPT可以起到有效的抗肿瘤作用。NAMPT已成为抗肿瘤药物研究新靶点,其抑制剂FK866、GMX1778作为抗肿瘤药,已经进入临床试验。NAMPT抑制剂作用机制的研究主要包括诱导细胞凋亡、细胞自吞噬、抑制细胞增殖、血管生成等。本文综述了NAMPT抑制剂的抗肿瘤作用及机制研究。
- 韩雪张纬萍
- 关键词：肿瘤
- 重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测被引量：1
- 2011年
- 目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果:测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt(H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 kD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT(H247A)的酶活性降低了约5～10倍。结论:成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NAMPT(H247A)蛋白,为NAMPT蛋白作用研究提供了基础。
- 王峰黄鹏刘主卢韵碧魏尔清张纬萍唐淳
- 关键词：磁共振波谱学重组蛋白质类NAMPT蛋白纯化
