广西壮族自治区自然科学基金(0542025)
- 作品数：7 被引量：9H指数：3
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- 广西巴马小型猪活化素β_A/β_B基因cDNA克隆与序列分析被引量：2
- 2007年
- 目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。
- 兰干球黄雄军郭亚芬李芳芳王爱德蒋和生
- 关键词：巴马小型猪
- 广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2007年
- 目的扩增广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA序列,分析其序列结构特点,为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据,也为日后构建原核表达载体、研究Ghrelin基因的生物功能奠定基础。方法以广西巴马小型猪胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增Ghrelin的cDNA,纯化连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果经测序证实克隆得到的广西巴马小型猪Ghrelin cDNA序列全长为357 bp,与相关文献报道一致。同源性比较发现,广西巴马小型猪Ghrelin cDNA基因序列与GenBank报道的猪相应序列同源性为99.7%,只有一处发生碱基突变。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪Ghrelin cDNA。
- 郭亚芬罗琴王世凯兰干球王爱德
- 关键词：生长素广西巴马小型猪克隆
- 广西巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA克隆和序列分析被引量：5
- 2007年
- 目的通过RT-PCR扩增广西巴马小型猪Myostatin cDNA序列,经过连接、转化、克隆测序后,与NCBI中发表的猪Myostatin序列进行同源性比较,分析广西巴马小型猪Myostatin的cDNA序列结构特点及与其他物种间的聚类关系,为日后构建Myostatin高效表达载体及进一步研究Myostatin对广西巴马小型猪肌肉生长的影响奠定基础。方法以广西巴马小型猪的肌肉组织总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),利用合成的特异性引物,扩增得到巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA的全序列。该扩增片段经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增,经一系列鉴定后,测序。结果本实验克隆到巴马小型猪Myostatin基因cDNA序列长度为1128 bp,与GenBank报道的猪Myostatin基因cDNA序列同源性高达99.7%,与人、奶牛、家鼠等物种的cDNA序列间同源性可达到92.3%以上,证明Myostatin基因具有较高的保守性。同时发现广西巴马小型Myostatin基因cDNA序列有三处存在碱基突变,两个为同义突变,一个为错义突变。
- 王世凯兰干球罗琴郭亚芬王爱德
- 关键词：广西巴马小型猪MYOSTATIN基因克隆
- 广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)克隆及原核表达被引量：1
- 2007年
- 目的通过RT-PCR扩增获得广西巴马小型猪Follistatin的cDNA全序列,经克隆测序分析其cDNA序列结构,进而构建pET-Fo原核表达质粒,使用IPTG诱导表达获得其融合蛋白,为将来进一步研究Follistatin对广西巴马小型猪肌肉生长和繁殖性能的影响奠定基础。方法从广西大学巴马小型猪卵巢中提取总RNA,并以其为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),在合成的特异性引物引导下,扩增获得广西巴马小型猪卵泡抑素(Follistatin)cDNA的全序列,长度为1 035 bp。将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行序列测定及分析。结果广西巴马小型猪卵泡抑素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪卵泡抑素同源性高达99.4%。同时,将目的基因插入到原核表达载体pET 32a+多克隆位点中,构建了Follistatin的原核表达载体,并转化于大肠杆菌BL21。转化菌经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析。结论实验已成功地表达了Follistatin的融合蛋白(约58.4 ku)。
- 郭亚芬兰干球莫毅梁方方杨秀荣蒋钦杨蒋和生王爱德
- 关键词：广西巴马小型猪卵泡抑素克隆原核表达
- 广西巴马小型猪生长期日粮蛋白与能量水平需要的测定被引量：2
- 2007年
- 目的本试验对生长期（45～117日龄）的广西巴马小型猪进行了生长饲养实验。方法试验一：选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪，按平均体重随机分为四组（10头／组）。在45～80日龄，四个组分别喂以含蛋白质水平为13％、14％、16％、18％的日粮；在81～117日龄，仍以上面的40头广西巴马小型猪为实验材料，分别喂以含蛋白质水平为11％、12％、13％、14％的日粮。试验二：选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪，按平均体重随机分为四组（10头／组）。分别喂以日粮1（CPl5％、DEl2．95MJ／kg），日粮2（CPl5％、DEl3．37MJ／kg），日粮3（CPl3％、DEl2．95MJ／kg）和日粮4（CPl3％、DEl3．37MJ／kg）。结果在45～80日龄，上述不同蛋白质含量的日粮对广西巴马小型猪的总增重影响差异不显著（P〉0．05）；在81～117日龄，蛋白水平为12％、13％、14％的日粮对小型猪的总增重影响差异不显著（P〉0．05），但蛋白质水平为11％的日粮组总增重显著低于前面三组（P〈0．05）。试验二的结果表明，4种不同能量与蛋白组合的日粮对生长期（45～75日龄）小型猪的总增重影响差异不显著（P〉0．05）。结论本实验结果表明广西巴马小型猪生长期（45～117日龄）日粮营养需要水平为粗蛋白12％～13％，消化能12．95MJ／kg。日喂料量为体重的2．O％～2．25％即可维持广西巴马小型猪的生长期（45～117日龄）较缓慢的生长速度。
- 兰干球郭亚芬王爱德
- 关键词：广西巴马小型猪粗蛋白质消化能
- 主动免疫猪活化素重组融合蛋白疫苗对巴马小型猪生长性能的影响研究
- 2009年
- 以含有巴马小型猪活化素成熟肽基因的重组质粒pRSETA-ACTA和pRSETA-ACTB的重组融合蛋白疫苗,对60日龄的巴马小型猪进行免疫,以探讨活化素免疫调控动物生长性能的作用机理。结果表明:主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTA对巴马小型猪的日增重无显著影响(P>0.05);而主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTB后1～28d、29～56d、1～56d,试验组日增重比对照组分别提高了5.3%(P>0.05)、17.4%(P<0.05)和14.2%(P<0.05)。ELISA检测结果发现,试验猪主动免疫ACTA或ACTB重组融合蛋白疫苗后均能显著产生抗活化素抗体(P<0.05);主动免疫ACTB重组融合蛋白疫苗极显著地提高了血清中卵泡抑制素(FS)的浓度(P<0.01)。可见,该研究制备的ACTB重组融合蛋白疫苗可有效促进巴马小型生长猪的生长、提高血清中FS的浓度。
- 冯雪萍兰干球郭亚芬陈江伟阮志华易德桥范晶李柏
- 关键词：重组融合蛋白巴马小型猪主动免疫
- 广西巴马小型猪脂联素cDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 为了克隆广西巴马小型猪脂联素基因的cDNA全序列及序列分析,试验利用引物悬挂延伸PCR法,以基因组总DNA为模板,先分别扩增得到编码脂联素的第2外显子和第3外显子的序列,再以这2个外显子为模板,进行第2轮PCR,纯化连接pMD 18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果表明:经PCR产物测序证明,得到大小与脂联素基因编码序列大小相同的片段,此片段长度为732 bp;同源性比较分析发现,广西巴马小型猪脂联素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪脂联素同源性高达99.7%,有2处发生了碱基错义突变。
- 郭亚芬罗琴易德桥兰干球王爱德
- 关键词：广西巴马小型猪脂联素克隆
