国家自然科学基金(30672011)
- 作品数：32 被引量：103H指数：6
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- 氨甲蝶呤多聚谷氨酸的检测及其临床应用价值被引量：4
- 2008年
- 氨甲蝶呤多聚谷氨酸(methotrexate polyglutamate,MTXPG)为氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)在细胞内的代谢产物,其蓄积程度决定着MTX的细胞毒性和治疗效果。MTXPG的检测有利于监测其在细胞内的浓度,指导临床用药和预后判断。本文就MTXPG在细胞内的代谢过程、检测方法及其在临床疾病治疗中的应用价值做一综述。
- 李明沈佐君
- 甲氨蝶呤对映体诱导肺癌细胞耐药后引起血管内皮细胞分化差异的研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究甲氨蝶呤（MTX）对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后，MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性。方法用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞，流式细胞双色分析细胞CD44／CD31以及P-170表达；皮下接种裸鼠，成瘤后取瘤体切片，进行CD34组化染色，计数新生微血管密度（MVD）。以A549亲本细胞（未获得耐药）作为对照组。结果分别建立耐药浓度为15μmol／L的L—MTX和D—MTX的A549耐药细胞株；它们与各自对映体的耐药指数分别为12．4±1．2和20．14-2．3；A549亲本细胞、L—MTX耐药细胞和D．MTX耐药细胞中：CD31’阳性率分别为55．5％±9．7％、32．9％±8．O％和91．9％±3．2％，差异有统计学意义（F=511．92，P=0．000）；P-170阳性率分别为85．5％±4．6％、71．5％±8．2％和87．0％±8．9％，L—MTX耐药细胞P-170的阳性率低于D．MTX耐药细胞（t=6．13，P=0．002）；3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计新生MVD，A549亲本细胞为3．6±1．2，L-MTX耐药细胞为7．24-1．7，D-MTX耐药细胞为55．9±11．9，D．MTX耐药细胞显著高于L—MTX耐药细胞（t=13．37，P=0．000）。结论MTX对映体诱导肺癌A549耐药细胞向血管内皮细胞分化能力不同，D—MTX耐药细胞经血管转移高于L．MTX耐药细胞，这提示MTX制剂中D型组分不能简单当成污染物而忽视，应尽量选用单-对映体的L-MTX药物制剂，减少D—MTX带来的副作用。
- 何晓东胡世莲沈佐君陶绍能董林朱园园李明
- 关键词：抗药性甲氨蝶呤细胞分化对映体
- 利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞被引量：5
- 2013年
- 目的建立一种新型免疫磁珠方法，检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞（CTCs）。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者，其中I期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例，健康志愿者20名。将不同数量（50、100、200、500、1000个）的肺癌细胞株（A549）混入2ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样，对该血样进行红细胞裂解和离心，沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子（EpCAM）的抗体反应，然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离，与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上，最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数。计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性，同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性。用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs，将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组，以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性，同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性。结果掺人肿瘤细胞回收试验的回收率在68％～82％之间，掺入细胞间回归方程为Y=0．6419X＋8．8875，回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性（相关系数尺。=0．9916，P〈0．05）。42例肺癌患者中有18例（42．9％）CTCs阳性，其中，I期CTCs检出率为0，II期CTCs检出率为11．1％，Ⅲ期CTCs检出率为62．5％，IV期CTCs检出率为70％。CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系（P〉0．05），而与临床分期（TNM）有密切关系（P〈0．05）。特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs。结论新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞，有�
- 嵇金陵何晓东索美芳张培黄蓉孙余婕沈佐君
- 关键词：肿瘤循环细胞免疫磁化分离肿瘤细胞黏附分子
- 叶酰多聚谷氨酸合成酶与肿瘤耐药被引量：2
- 2010年
- 叶酰多聚谷氨酸合成酶(folyl-polyglutamate synthetase,FPGS)是近几年来研究比较多的肿瘤耐药靶酶之一。随着人们对其在基因组学和蛋白组学研究的逐渐深入,涉及FPGS(分胞浆型cFPGS和线粒体型mFPGS两种异构体)与肿瘤耐药的研究也越来越多。本文就FPGS结构、功能、生化特点及其与肿瘤耐药关系作一综述,并探讨其在临床的应用前景和意义。
- 孙利沈佐君
- 关键词：肿瘤抗药性
- CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本表达的关系被引量：2
- 2016年
- 目的通过分析慢性粒细胞白血病(CML)患者转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA与bcr/abl^(P210)融合基因转录本(简称bcr/abl^(P210))的表达水平,探讨两者在CML发病过程中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测73例CML患者外周血和骨髓中TGF-β1 mRNA及bcr/abl^(P210)的表达水平,以22名健康体检者作为正常对照组。TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)的相关性采用Pearson相关分析。结果 CML患者骨髓和外周血样本中TGF-β1 mRNA、bcr/abl^(P210)的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组外周血中TGF-β1 mRNA的表达水平明显高于CML患者骨髓中TGF-β1 mRNA的表达水平(P<0.05),正常对照组TGF-β1 mRNA的表达水平是CML组的11.39倍。相关性分析显示CML患者TGF-β1 mRNA与bcr/abl^(P210)呈正相关(r=0.53,P<0.01)。结论骨髓TGF-β1 mRNA有可能作为一种新的CML诊疗指标。
- 许大兵孙余婕沈佐君
- 关键词：融合基因转录本
- 氨甲蝶呤耐药细胞内整体DNA甲基化水平检测方法的建立及其应用被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种简便快速检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，以用于临床甲基化诊断。方法采用高效毛细管电泳技术，以pH9．6的48mmol／L碳酸氢钠溶液[含60mmoL／L十二烷基硫酸钠（SDS）]为分离缓冲液，检测波长为256nm，在20kV电压下，0．7psi压力进样时间5s，对2’-脱氧胞苷（dC）、5-甲基-2’-脱氧胞苷（mdC）、2’-脱氧腺苷（dA）、2’-脱氧胸苷（dT）、2’-脱氧鸟苷（dG）5种物质进行分离。在此基础上检测氨甲蝶呤（MTX）诱导的肺癌A549耐药细胞株内整体DNA甲基化水平。结果通过不断优化分离缓冲液中SDS浓度（40、60、80mmol／L）、pH值（9．4、9．6、9．8）、分离电压（15、17、19、20、22kV）、进样时间（5、10、15、20、30S）和毛细管温度（15、20、25、30℃），建立高效毛细管电泳检测细胞内整体DNA甲基化水平的方法，可在10min内实现dC、mdC、dA、dT、dG的完全分离，其日内变异系数（CV）〈0．2％，日间CV〈2％，最低检出限为2μmol／L。检测肺癌A549亲本细胞甲基化水平为（4．80±0．52）％；而不同浓度（15、30、40μmol／L）MTX诱导耐药A549细胞株的甲基化水平分别为（4．20±0．44）％、（3．70±0．36）％、（3．10±0．35）％。结论建立高效毛细管电泳检测整体DNA甲基化水平的方法具有高效、快速、简单、灵敏的特点；MTX耐药细胞株内整体DNA甲基化水平随着耐药浓度的增加明显降低。
- 李明胡世莲何晓东陶绍能董林朱园园吴剑锋沈佐君
- 关键词：氨甲蝶呤DNA甲基化电泳
- 甲氨蝶呤对映体诱导的肺癌A549耐药细胞株中VEGF及其受体表达差异的研究被引量：10
- 2009年
- 目的:通过探讨甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对映体耐药细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)及其受体表达的差异,以反映MTX对映体耐药细胞在肿瘤中血管形成能力的不同。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)技术分别检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组中VEGF、血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)-1和VEGFR-2mRNA的表达水平;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,行CD34免疫组织化学检测,新生微血管密度(microvessel density,MVD)计数;采用双层软琼脂克隆形成实验检测D-(-)-MTX/A549组、L-(+)-MTX/A549组细胞的克隆形成率。结果:RFQ-PCR检测结果显示,D-(-)-MTX/A549组VEGF、VEGFR-1和VEGFR-2Ct值/β-actinCt值分别为1.668±0.127、1.872±0.133和1.919±0.107,L-(+)-MTX/A549组的比值分别为2.035±0.185、2.221±0.157和2.255±0.140,亲本细胞组的比值为2.057±0.123、2.291±0.138和2.354±0.131;3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计MVD显示亲本细胞为3.29±1.11,L-(+)-MTX/A549细胞为8.00±2.14,D-(-)-MTX/A549细胞为57.88±13.87;软琼脂实验检测克隆形成率发现D-(-)-MTX/A549组为(0.625±0.088)%,L-(+)-MTX/A549组为(1.050±0.095)%,亲本细胞组为(1.250±0.248)%。研究结果显示D-(-)-MTX/A549组和L-(+)-MTX/A549组以及亲本细胞组之间差异均有统计学意义(P<0.05),而L-(+)-MTX/A549组与亲本细胞组之间则差异无统计学意义(P>0.05)。结论:D-(-)-MTX诱导肺腺癌A549耐药细胞在肿瘤血管形成上的能力大于L-(+)-MTX诱导的细胞。
- 董林何晓东陶绍能孙余婕李明沈佐君
- 关键词：甲氨蝶呤
- 表皮生长因子受体介导的信号转导与肿瘤侵袭、转移的关系研究进展被引量：8
- 2008年
- 表皮生长因子受体(EGFR)属受体酪氨酸蛋白激酶,在多种肿瘤中表达或高表达。与配体结合后传递信号至细胞核内,调节基因的表达。参与生长、分化、增殖、血管发生和凋亡等多种细胞功能的调节。肿瘤的侵袭、转移是一个复杂的过程,也是导致肿瘤患者死亡的主要原因。本文就EGFR的结构、信号转导及其在肿瘤的侵袭和转移中的作用作一综述,为肿瘤的靶向治疗提供新思路。
- 陶绍能沈佐君
- 关键词：信号传导肿瘤侵润肿瘤转移
- 二氢叶酸还原酶与肿瘤耐药被引量：2
- 2010年
- 二氢叶酸还原酶是核酸代谢中的关键酶之一,是肿瘤化疗药物的主要靶酶。随着人们对其在基因水平研究的逐渐深入,发现氨甲蝶呤的靶酶二氢叶酸还原酶是引起耐药的主要原因。本文就二氢叶酸还原酶结构、功能及其与肿瘤耐药关系作一综述,并探讨其在临床的应用前景和意义。
- 李道静沈佐君
- 关键词：二氢叶酸还原酶肿瘤氨甲蝶呤抗药性
- 氨甲蝶呤对映体耐药A549细胞株的建立及其生物学特征被引量：11
- 2009年
- 目的诱导并建立耐氨甲蝶呤对映体的A549细胞株并观察耐药细胞系(L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549)的生物学特性。方法以MTX对映体为诱导剂,采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法诱导A549细胞株,建立MTX不同对映体耐药细胞系;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;MTT法绘制细胞生长曲线;MTT法检测耐药细胞株的耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期和细胞的分裂增殖能力。结果L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药指数分别为6.0的和20.2。倒置相差显微镜观察细胞形态发生了改变;细胞生长曲线显示D-(-)-MTX/A549的增殖略慢于亲本细胞,而L-(+)-MTX/A549的增殖最慢;流式细胞仪检测细胞周期结果显示L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药细胞株S期细胞数量减少(P<0.05),G0/G1期细胞增多(P<0.05);CFSE检测A549、L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549的MFI分别为(6.08±0.55)、(7.72±0.30)、(6.90±0.18)。两对映体细胞株间有明显手性差异。结论本研究建立了MTX两种对映体耐药细胞株,为进一步研究其耐药机制提供了一种实验模型。
- 陶绍能何晓东董林李明朱园园孙自敏沈佐君
- 关键词：氨甲蝶呤A549细胞对映体
