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补肾益智方有效部位群对M146L细胞分泌β淀粉样蛋白的抑制研究被引量：4: 2014年; 目的探讨补肾益智方有效部位群对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白的影响,寻找潜在的具有抑制Aβ分泌的中药复方有效群。方法体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病(AD)β淀粉样前体蛋白(beta-amyloid protein precursor,APP)基因及突变型早老素1(prsenilin-1,PS1)基因的中华仓鼠卵巢上皮细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白Aβ1-42,建立Aβ1-42过度表达的细胞模型。加入待筛选的补肾益智方有效提取部位群,用MTT法检测不同浓度的补肾益智方有效提取部位群(0,12.5,50μg/ml)对M146L细胞的毒性作用,应用Western blot免疫印迹方法分别检测突变型PS1M146L和野生型APP751双转染稳定表达CHO细胞系分泌的Aβ1-42的变化。结果不同浓度的补肾益智方有效部位群对M146L存活均无影响,不具有细胞毒作用。其中浓度为12.5μg/ml有效部位群F1和F2对M146L细胞分泌Aβ1-42有抑制作用。结论一定剂量的补肾益智方有效提取部位群对M146L细胞分泌的Aβ1-42有明显的抑制作用,其机制有待进一步研究。; 杨从侯雪芹闫蓉刘四军苏如玉章时杰张玉何文青陈云波王奇; 关键词：阿尔茨海默病 Β淀粉样蛋白

补肾益智颗粒的质量标准研究被引量：2: 2012年; 目的建立补肾益智颗粒的质量标准研究。方法采用薄层色谱法对补肾益智颗粒中的蛇床子、女贞子和制何首乌进行定性鉴定,采用高效液相色谱法对其中蛇床子素和2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量进行测定。对于蛇床子素,高效液相色谱系统是由Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水(65∶35)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为322 nm。对于葡萄糖苷,高效液相色谱系统包括C18(250 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(30:70)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为320 nm。结果补肾益智颗粒的蛇床子、女贞子和制何首乌供试品薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点;蛇床子素在0.09～1.35μg范围内与峰面积积峰值线性关系良好(r=0.999 9)。2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(二苯乙烯苷)在0.84～3.15μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)。平均回收率分别为100.52%和99.75%。结论建立的质控方法简便,快速,准确,回收率高,重现性好,可用于补肾益智颗粒的质量控制。; 周娟张艳平王奇陈云波胡英杰; 关键词：薄层色谱法高效液相色谱法蛇床子女贞子制何首乌

4种阿尔茨海默病动物模型行为学改变及凋亡机制的比较被引量：8: 2015年; 目的探讨4种常见阿尔茨海默病(AD)动物模型在研究凋亡机制领域中的优势。方法采用4种常见AD模型(东莨菪碱致记忆障碍模型、鹅膏蕈酸致痴呆大鼠模型、快速老化模型、双转基因小鼠模型),利用Morris水迷宫测试动物模型认知能力;免疫印迹检测Bcl-2蛋白表达水平;TUNEL染色检测凋亡水平。结果在凋亡机制研究探讨中,快速老化小鼠(SAM)在Morris水迷宫测试、Bcl-2蛋白表达以及凋亡检测中其正常组与模型组均有显著差异(P<0.05)。结论 SAM模型在老年痴呆凋亡机制中有明显优势,为中药治疗老年痴呆的临床前研究提供指导。; 侯雪芹张磊林雅萍田会娟张春霞刘玉杨从王奇陈云波程淑意方淑环; 关键词：老年痴呆模型 MORRIS水迷宫免疫印迹免疫组化

阿尔兹海默病β淀粉样蛋白形成和沉积的发病机制及中医药干预的可能途径被引量：13: 2013年; 阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是以认知功能障碍和记忆损害为主要临床特征的神经退行性疾病,其病因复杂,并缺乏有效的诊断、治疗和预防手段。β淀粉样蛋白(Aβ)被认为是AD治疗的关键靶标。Aβ是AD形成和发展的关键因素,以Aβ为靶标可能是AD预防和治疗的有效策略。中药对减少Aβ生成和沉积、促进Aβ清除方面已取得了系列的研究成果。中医药治疗AD应创新研究思路,以Aβ为靶标,开展方药配伍、临床试验研究,从而提高中医药治疗AD的疗效。; 闫蓉常翔杨从苏如玉侯雪芹张磊张春霞方淑环陈云波王奇; 关键词：老年性痴呆 Β-淀粉样蛋白

新生小鼠海马神经元培养及形态学观察的优化方法被引量：3: 2014年; 目的：探讨一种更加优化的体外培养海马神经元及进行形态学观察的方法，为阿尔茨海默病（A D ）神经突触的研究奠定基础。方法选择新出生后0～1 d的C57BL/6J小鼠，断头取双侧海马，采用低浓度胰酶消化加机械分离的方法，使用无血清培养基进行神经元原代培养，培养17 d后利用磷酸钙共沉淀法进行绿色荧光蛋白（GFP ）的转染，于荧光显微镜下观察海马神经元和树突棘形态特征。结果采用此方法进行的海马神经元原代细胞培养，神经元生长良好，转染GFP后可以看到清晰的轴突/树突和树突棘突等典型的神经细胞结构特征。结论此技术方法所培养的海马神经元生长良好，磷酸钙共沉淀法转染GFP后能够更加清晰地观察到神经元及树突棘的形态特征。; 常翔方淑环张玉闫蓉屈赵侯雪芹苏如玉张磊杨从王奇; 关键词：海马神经元树突棘

基于正邪理论的老年性痴呆动物模型造模思路初探: 2012年; 老年性痴呆（Alzheimer’s Dis eas e,AD）属中医学老年呆病范畴,是老年期常见的一种慢性退行性疾病,以进行性智能减退、记忆力障碍等为主要表现。随着人口老龄化的进展,其发病呈上升趋势,严重威胁人类的健康。; 荣翠平陈云波王奇; 关键词：老年性痴呆正邪理论动物模型

石菖蒲活性成分对双转基因小鼠APP及神经突触超微结构的影响被引量：26: 2014年; 目的探讨石菖蒲活性部位β-细辛醚和丁香酚对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)表达及神经突触超微结构的影响。方法 3月龄SPF级雄性APPswe/PS1dE9双转基因小鼠12只,随机分为4组:模型组、安理申(以安理申为阳性对照药)组、β-细辛醚组及丁香酚组,每组3只,用同龄同背景APPswe/PS1dE9转基因阴性小鼠3只作为正常对照组。用药4个月后,免疫组织化学染色方法检测大脑内海马及皮层APP表达水平,并采用透射电子显微镜观察海马CA1区神经元及神经突触的超微结构的变化。结果模型组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比较正常对照组显著增加(P<0.01)。与模型组比较,安理申组和β-细辛醚组在海马CA1区和皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P<0.01);丁香酚组皮质的APP阳性面积百分比显著减少(P<0.01)。透射电子显微镜观察,与正常对照组比较,模型组小鼠海马CA1区神经元神经毡内突触结构表现为大片的轴浆空泡化,突触数量减少,突触界面变短或融合消失,突触小泡数量明显减少,突触前膜、后膜及突触间隙大多模糊不清,突触后成分致密区厚度变薄,典型的突触结构已遭破坏,部分线粒体有轻微破损。安理申组、β-细辛醚组及丁香酚组小鼠海马CA1区神经突触结构与正常对照组比较无明显差异,与模型组比较在细胞器结构、轴浆空泡化、突触数量、突触界面、突触小泡数量及突触结构上均有不同程度的改善。结论β-细辛醚及丁香酚可以抑制APP的过量表达,对与学习记忆密切相关的突触有一定的保护和修复作用。; 张春霞郭俊和陈云波闫蓉王奇于旭华魏刚刘四军程淑意; 关键词：阿尔茨海默病 Β-细辛醚丁香酚 Β淀粉样前体蛋白

体外抗AD药物筛选中MTT、Edu和RTCA法的比较研究被引量：6: 2015年; 目的比较MTT、Edu和RTCA三种检测细胞增殖方法的重复性、稳定性和灵敏性,探讨使用三种方法进行抗AD药物体外筛选的适应性。方法采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型作为阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)的体外模型,运用以上3种方法观察补肾益智方提取部位对谷氨酸导致的PC12细胞损伤的增殖变化。结果 MTT法检测药物浓度在100μg/ml时细胞活力和增殖达到47%;Edu法检测药物浓度在25μg/ml时细胞活力和增殖达到36.7%;RTCA法检测药物浓度在25μg/ml比在100μg/m L和6.25μg/ml浓度时细胞活力和增殖能力高,且在不同的时间段增殖率有所不同。结论 MTT法简单、快速、经济,结果与细胞中线粒体酶活性有关,间接反映细胞的增殖状态;Ed U标记技术灵敏、客观,特异性标记分裂期细胞,直接反映细胞的增殖状态;RTCA法方便、宏观、可信,通过细胞与电极板的相互作用,直观反应细胞的增殖趋势。; 侯雪芹张晓晶王奇陈云波程淑意方淑环; 关键词：阿尔茨海默病细胞增殖 MTT法

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广东省科技计划工业攻关项目(2010A030100009)

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