河南省科技攻关计划(92102110018)
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
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- 相关机构：河南农业大学中国动物疫病预防控制中心更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪IgGⅡB类Fc受体基因剪接异构体的克隆及序列分析被引量：2
- 2010年
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列,利用Prim er软件设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因,将扩增的基因片段插入pTG19-T载体进行测序,利用DNAStar Protean软件对基因的氨基酸序列潜在抗原表位进行预测.结果表明,克隆的swFcγRⅡB基因序列长度为951 bp,编码316个氨基酸,与已发表序列的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.3%和98.3%,其胞内区多出19个氨基酸的插入,其氨基酸序列至少存在3个潜在优势抗原表位的区域.swFcγRⅡB基因存在亚类,所克隆基因是swFcγRⅡB基因的1种RNA剪接异构体,预示了swFcγRⅡB基因至少存在2种RNA剪接异构体.
- 刘玉松夏平安刘肖萍张志远刘明莉王中明段二珍卢晓艳崔保安
- 关键词：抑制性受体抗原表位
- 猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体的分子特征
- 根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因剪接异构体(FJ608551),测定其序列并进行序列分析,将swFc...
- 刘玉松刘肖萍张志远范旭赵琳张凤华徐红运段二珍卢晓艳夏平安崔保安
- 关键词：剪接异构体抑制性受体基因克隆
- 文献传递
- 猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达
- 【目的】克隆猪Fc受体γ亚单位基因,构建原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备多克隆抗体。【方法】研究中应用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞总RNA中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,测序结果表明得到了与预期相符的长为29...
- 张志远徐红运刘肖萍卢晓艳段二珍刘玉松夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 猪IgGⅡB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Prim er 5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRIIB1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2结构域蛋白分子基因片段,PCR产物经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后将其插入到原核表达载体pET-32 a中,构建了3种猪FcγRIIB剪接异构体原核表达载体pET-EY,pET-AY,pET-BY,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下成功表达了相对分子质量约为36,29,27 kD融合蛋白表达,纯化后的融合蛋白分别免疫小鼠制备鼠源血清.ELISA结果显示抗体效价为1∶5 120,1∶5 120,1∶10 240.免疫印迹结果显示制备的多克隆抗体可以与融合蛋白特异性结合.
- 刘肖萍张志远刘玉松赵琳范旭徐红运张凤华夏平安崔保安
- 关键词：FCΓRIIB原核表达
- 猪唾液酸黏附素氨基端结构域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1ku的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
- 张继希张志远张宜娜周永辉张祥郝一妹张元元夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 猪FcγR ⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析
- 2011年
- 目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性。方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡBDNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成。结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失。转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体。结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性。
- 张宜娜刘肖萍张志远段二珍张继希周永辉夏平安崔保安
- 关键词：FCΓR剪接异构体多样性
- 感染PRRSV Nsp2基因部分缺失变异株的仔猪抗体变化规律被引量：2
- 2011年
- 为了解PRRSV Nsp2基因缺失变异株的致病性,采用2个Nsp2基因分别连续缺失3个和89个碱基的PRRSV变异株Hn-2(GenBank:FJ237419)和Hn-4(GenBank:FJ237421)的病毒液,人工滴鼻感染断奶仔猪,同时用Marc-145健康仔猪细胞培养液滴鼻作对照,在感染后0,7,14,24,32,41,50,60和70 d无菌采血,分离血清,用RT-PCR方法检测病毒、用N-ELISA方法和免疫荧光抑制试验分别检测抗PRRSV N蛋白抗体和抗PRRSV中和抗体,比较分析不同时期病毒复制和抗体产生的变化规律。结果表明,仔猪感染Hn-2和Hn-4毒株后7～14 d均能检测到病毒,第7天能检测到抗PRRSV N蛋白抗体,并一直维持较高水平,第41和50天检测到较低水平的中和抗体,随后中和抗体效价逐渐升高。试验猪均未出现死亡,表明PRRSV Nsp2基因缺失变异株不一定导致感染猪的死亡。
- 张凤华卢晓艳徐红运赵琳刘玉松范旭夏平安崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白中和抗体NSP2基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株NSP2和ORF5的变异分析
- 利用RT-PCR方法对2006年到2009年期间,从河南省不同地区疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪场中,成功分离出9株PRRSV河南病毒株。根据GenBank上已发表的PRRSVCH-1a和VR2332株设计扩增NSP2和...
- 卢晓艳李伟娟张志远刘肖萍段二珍夏平安崔保安
- 关键词：NSP2ORF5克隆
- 文献传递
- 重组猪IgGIIB类Fc受体剪接异构体胞外区及结构域的原核表达与抗体制备
- 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体剪切异构体基因序列(FJ608551),利用Primer5.0软件设计合成3对特异性引物,从质粒pTG19-T-swFcγRⅡb1中用PCR方法扩增编码胞外区、EC1及EC2蛋白...
- 刘肖萍刘玉松夏平安赵琳范旭徐红运张凤华张志远崔保安
- 关键词：FCΓRIIB原核表达蛋白纯化
- 文献传递
- 猪FcγRⅢ的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 目的:构建猪FcγRIII基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备鼠抗猪FcγRIII抗血清。方法:从质粒pTG19-T-FcγRIII中用PCR方法克隆到编码完整猪FcγRIII蛋白分子的基因片段,将其插入到原核表达载体pET-32a中,构建了猪FcγRIII原核表达载体pET-FcγRIII,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经尿素洗涤纯化后,以纯化后的融合蛋白FcγRIII-His为抗原免疫小鼠,获得抗血清。Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清,ELISA结果显示抗体效价为1∶16000,具有高度特异性,免疫印迹结果显示制备的多抗可以与重组猪FcγRIII蛋白特异性结合。结果:成功构建猪FcγRIII原核表达载体,纯化到融合蛋白FcγRIII-His,用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论:成功获得了猪FcγRIII多克隆抗体,为进一步研究猪FcγRIII蛋白的功能奠定了基础。
- 徐红运夏平安张凤华赵琳范旭刘明莉刘玉松张志远崔保安
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
