辽宁省教育厅资助项目(05L475)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 人肿瘤抑素Tumstatin基因慢病毒表达载体的构建及其蛋白表达
- 2008年
- 目的构建Tumstatin基因慢病毒表达载体,进一步研究Tumstatin基因的功能及其在肿瘤治疗中的应用。方法采用PCR技术从含有Tumstatin基因的质粒pSPORT1-Sfi扩增目的基因Tumstatin,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU[含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因]中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-Tum,通过酶切、测序验证Tumstatin基因后,将pGC-FU-Tum质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带Tumstatin基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-Tum,并转染人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,Wstern blot检测目的蛋白Tumstatin的表达。结果pGC-FU-Tum中携有正确的Tumstatin基因;pGC-FU-Tum共转染包装细胞293T能产生高浓度的重组慢病毒GC-FU-Tum;目的基因Tumstatin能被重组慢病毒高效地转导入HUVEC,荧光显微镜下能直接观察到EGFP,Western blot能检测到Tumstatin蛋白在靶细胞中的表达。结论成功构建了携带Tumstatin基因的重组慢病毒载体;其蛋白表达与EGFP一致。。
- 焦伊胜王永来王桂玲
- 关键词：肿瘤抑素慢病毒载体基因
