国家自然科学基金(30240021)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：杨菁朱文玲宋存先陈连凤曾玉杰更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院清华大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：清华-裕元医学科学研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子的制备、表征及血管内局部给药效能被引量：7
- 2008年
- 目的制备包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs),评估其通过DISPATCHTM球囊在血管内局部给药的应用条件及给药效能。方法超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs,测定其载药量和包封率。激光光散射实验测定纳米粒子的粒径及分布,扫描电镜观察纳米粒子的表面形态。双室扩散池行体外药物释放实验,计算释放量,绘制累积释放曲线。通过新西兰白兔腹主动脉及小型猪冠状动脉内局部给药模型评估DISPATCHTM球囊血管内应用RPM-PLGA-NPs的实验条件及给药后不同时段血管组织药物浓度。结果成功制备了平均粒径为246.8 nm的RPM-PLGA-NPs,包封率为77.53%,平均载药量为19.42%。体外释放近似于零级过程,至2周释放75%的药物。成功建立经DISPATCHTM球囊新西兰白兔腹主动脉、中国实验用小型猪冠状动脉内局部给药模型,20.27 kPa灌注压力下经DISPATCHTM导管球囊灌注5 mg/ml RPM-PLGA-NPs 10 min,第7和14天后局部组织药物浓度为(2.438±0.439)和(0.529±0.144)μg/mg干重。结论超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs方法稳定可靠,包封效率高,载药量控制稳定,粒径小、范围窄,体外释放药物恒定、效果满意。纳米载药系统结合DISPATCHTM球囊导管能显著延长局部血管内药物浓度,为血管疾病提供新的治疗手段。
- 苗立夫杨菁黄超联宋存先曾玉杰陈连凤朱文玲
- 关键词：雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物局部给药
- 包载雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子的制备、表征及体外释放试验
- 2008年
- 背景:新型可生物降解多聚物纳米控释载药制剂能显著改善药物穿透组织能力、再分布时程和滞留时间,可能克服载药基质对血管修复的负性影响,有望避免药物洗脱支架晚期支架内血栓。目的:制备雷帕霉素-聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子(rapamycin poly(lactic-co-glycolic)acid nanoparticles,RPM-PLGA-NPs)并观察其表征及体外控释性能。设计、时间及地点:单一样本实验于2003-03/09在中国医学科学院,中国协和医科大学,生物医学工程研究所生物医学材料重点实验室完成。材料:聚乳酸-聚乙烯醇酸共聚物50∶50由美国Birmingham Polymers公司提供。方法:以可生物降解高分子材料聚乳酸-聚乙醇酸共聚物作载药基质,超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs,采用双室扩散池行体外药物释放试验。主要观察指标:测定平均载药量、平均包封率;激光光散射实验测定纳米粒子的粒径及分布;扫描电镜观察纳米粒子的表面形态;高效液相色谱法计算体外药物释放量、绘制累积释放曲线。结果:成功制备了平均粒径为246.8nm的RPM-PLGA-NPs,平均粒径246.8nm,粒径分布集中在208～294nm,呈窄分布;包封率大于77%,平均载药量为19.42%。体外释放近似于零级过程,至2周释放75%的药物。结论:超声乳化-溶剂挥发法制备RPM-PLGA-NPs稳定可靠,包封效率高,载药量控制稳定,粒径小、范围窄,体外释放药物恒定、具有良好的控释效能。
- 苗立夫杨菁黄超联宋存先曾玉杰陈连凤朱文玲
- 关键词：雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物体外药物释放
- 包载雷帕霉素的聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒子对小型猪冠状动脉损伤后平滑肌细胞增殖的影响及机制
- 2016年
- 目的研究局部血管内灌注包载雷帕霉素（RPM）的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物（PLGA）纳米粒子（NPs）对损伤-狭窄小型猪冠状动脉损伤后平滑肌增殖、基质金属蛋白酶（MMP）-2、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP）-2及p27^kip1mRNA表达的影响。方法28头小型猪模型随机数字表法分为4组，每组7只，冠状动脉过大球囊损伤后经Dispatch^TM球囊局部分别灌注生理盐水、5．0mg／ml空白NPs、1．0mg／ml RPM和5．0mg／ml RPM—PLGA NPs。手术第30天复查造影并留取冠脉标本。评价干预前后各组冠脉造影血管狭窄程度，切片常规行苏木精-伊红、Weigert氏间苯二酚复红和苦味酸-天狼星红染色并行形态学比较。免疫组化染色法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、MMP-2、TIMP-2，原位杂交法检测p27^kip1 mRNA表达水平。结果共21头小型猪完成实验：生理盐水组、空白PLGANPs组、RPM组及RPM—PLGANPs组分别6、4、5、6头。各组间损伤-狭窄模型造成的即刻损伤程度无统计学意义，RPM—PLGANPs组第30天造影血管狭窄程度明显低于生理盐水和空白NPs组（P〈0．01）和RPM组（P〈0．05）。RPM—PLGANPs组新生内膜面积NIA、内外弹力板围绕面积比值及增生指数显著小于其他三组（均P〈0．05），而最大内膜厚度MIT、内弹力板围绕面积IELA大于其他三组（均P〈0．05）。RPM—PLGANPs组阳性区域平均积分光密度值为0．35±0．06，显著高于空白NPs组（0．12±0．05，P〈0．01）及生理盐水、RPM组（0．16±0．03和0．15±0．03，P〈0．05），MMP-2／TIMP-2比值及PCNA组化染色阳性表达指数及均低于其余三组（均P〈0．05）。结论RPM-PLGA NPs结合Dispatch^TM球囊血管腔内给药抑制损伤后小型猪冠状动脉VSMC增殖和细胞外基质生成而抑制再狭窄发生，是用于治疗血管增殖性疾患有临床前景的手段之一。
- 苗立夫尹燕平崔永亮陈连凤曾勇黄超联朱文玲宋存先张华佘明鹏杨菁
- 关键词：雷帕霉素小型猪冠状动脉再狭窄局部给药
- 雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响被引量：4
- 2010年
- 目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照。采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响。结果10μg/L及以上浓度的RPM和50μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-smc生长,并呈浓度依赖性。细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24 h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均<0.01),但两组间细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P<0.01)。结论RPM-PLGA NPs抑制体外培养的HUASMC生长效果与RPM相似,并可显著抑制体外培养HUASMC p27蛋白表达,阻抑其细胞周期进程于G_1/S期而抑制其细胞增殖。
- 苗立夫黄超联陈连凤朱文玲杨菁王以光张华刘佩毛佘铭鹏宋存先
- 关键词：雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物人脐动脉平滑肌细胞细胞增殖
- 雷帕霉素对离体培养人脐动脉平滑肌细胞增殖及细胞周期时相和p27蛋白表达的影响
- 目的:通过观察雷帕霉素(RPM)对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖、细胞周期时相和P27蛋白表达水平的影响,探讨RPM抑制HUASMCs增殖的作用机制和作用浓度(剂量)。方法:采用组织贴块法培养HUASMCs,应...
- 苗立夫陈连凤朱文玲曾勇黄超联黄燕王以光刘佩毛张华赵三妹
- 文献传递
- 包载雷帕霉素的乳酸-乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞bcl-2、p27^(kip1)表达及细胞凋亡的影响
- 2015年
- 目的观察雷帕霉素(RPM)及其乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)形成的载药纳米粒子(RPM-PLGA-NPs)在不同浓度和作用时间下对离体培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)细胞凋亡及调控基因bcl-2、p27kip1表达的影响。方法离体培养HUASMCs细胞并分别予不同浓度的RPM、RPM-PLGA-NPs作用12和24 h,设立生理盐水及空白PLGANPs对照组,免疫组织化学方法检测p27kip1与bcl-2表达阳性率和表达水平的差异,采用流式细胞仪、DNA片段琼脂糖凝胶电泳及末端原位标记法检测各组HUASMCs凋亡及细胞凋亡率,噻唑蓝比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA-NPs对HUASMCs存活率的影响。结果 RPM及RPM-PLGA-NPs组抑制HUASMCs增殖并呈剂量依赖关系,HUASMCs DNA电泳呈梯度条带阳性。流式细胞仪检测RPM 100 ng/ml和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的细胞凋亡百分率分别为(45.45±2.36)%和(35.04±5.64)%,显著高于对照组的(2.60±0.95)%(P<0.01)。末端原位标记法检测高剂量干预组的24 h凋亡指数显著高于12 h组(P<0.05,P<0.01)。RPM 100 ng/ml组和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的p27kip1蛋白阳性表达指数(PEI)分别为(0.178±0.077)%和(0.192±0.052)%,显著高于对照组的(0.101±0.035)%(P<0.05)。Spearman秩相关检验显示RPM及RPM-PLGA-NPs组凋亡指数值与p27kip1的PEI无相关性。RPM-PLGA-NPs 50 ng/ml及RPM 10 ng/ml组bcl-2的PEI分别为(6.44±1.31)%和(5.49±1.06)%,显著高于对照组的(1.84±0.47)%和(2.06±0.53)%(P<0.05)。结论 RPM及RPM-PLGA-NPs上调离体培养的HUASMCs的p27kip1表达、促进细胞凋亡,并无下调抗细胞凋亡基因bcl-2表达的作用。相当载药量的RPM-PLGA-NPs较RPM促进血管平滑肌细胞凋亡的作用更明显,但与p27kip1表达水平无线性相关。
- 苗立夫崔永亮尹燕平陈莲凤张华刘佩毛朱文玲宋存先杨菁
- 关键词：雷帕霉素细胞凋亡人脐动脉平滑肌细胞
