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狐源犬瘟热病毒CDV-FOX-TA株核蛋白基因的原核表达及鉴定: 2008年; 应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×HisTag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE分析和Western blot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDVN蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原。; 简中友贾赟王全凯胡传伟肇慧君李叶; 关键词：犬瘟热病毒核蛋白原核表达

犬瘟热病毒核衣壳蛋白N基因的真核表达及鉴定被引量：2: 2008年; 根据GenBank发表的犬瘟热病毒N基因全序列,设计合成了1对特异扩增CDVN基因的引物。以山东泰安分离的CDV-FOX-TA株细胞毒中提取病毒RNA来制模板,利用RT-PCR扩增出了1.6kb的N基因,将其克隆到pIREShyg载体上,构建了pIRES-N真核表达载体。然后通过磷酸钙共沉淀法转染CHO-K1细胞,通过潮霉素筛选得到阳性克隆,间接免疫荧光实验(IFA)鉴定N基因在CHO细胞中的表达,并用RT-PCR方法从转录水平证实N基因在CHO-K1细胞中的表达,最终建立了CHO/CDV-N细胞株,为犬瘟热病毒的血清学检测和基因疫苗的研制奠定了基础。; 简中友贾赟王全凯徐立秋吴斌肇慧君李振荣; 关键词：犬瘟热病毒 N基因潮霉素 CHO-K1细胞

狐源犬瘟热病毒泰安株(CDV-FOX-TA)的分离与鉴定被引量：3: 2008年; 从具有疑似犬瘟热症状的病狐血液中分离到1株病毒,该病毒在MDCK细胞上生长良好,并能形成稳定的CPE。经电镜观察、理化特性、滴度测定、动物回归试验、RT-PCR和荧光定量RT-PCR鉴定,证实分离到的病毒为1株犬瘟热病毒强毒株,命名为CDV-FOX-TA。; 杨笃宝吕品胡传伟贾赟谢之景曹涤非任月刘海防; 关键词：狐狸犬瘟热病毒

检测犬瘟热病毒抗体的重组N蛋白-ELISA方法的建立及应用被引量：4: 2008年; 将已构建成功的重组质粒pET-N转化入Rosetta2(DE3)菌株中,在IPTG诱导下获得重组N蛋白。用镍离子亲和层析方法对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性进行SDS-PAGE电泳及Western blot检测。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种反应条件进行了优化,建立了检测CDV抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了270份血清样品,并与法国Synbiotics公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达92.4%。为应用血清学方法对犬科动物进行犬瘟热流行病学的调查奠定了基础。; 简中友贾赟王全凯徐立秋胡传伟李叶李振荣; 关键词：重组质粒重组N蛋白间接ELISA

蓝狐细小病毒的分离鉴定及其VP1基因序列分析被引量：1: 2009年; 从泰安地区送检的疑是细小病毒感染的蓝狐粪便中分离到一株病毒。经理化特性鉴定、血凝谱鉴定、人工感染蓝狐等鉴定,表明所分离病毒为细小病毒。并且根据GenBank上发表的犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)核酸序列,设计扩增VP1基因的引物,采用PCR技术扩增所分离细小病毒的VP1全基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果,所分离细小病毒的VP1基因全长2256bp,编码727个氨基酸,与CPV和FPV参照株的VP1基因同源性在98.7%～99.5%。VP1基因的系统发生分析表明所分离病毒与FPV的亲源关系最为密切。所分离病毒VP1蛋白375位氨基酸残基与CPV的VP1蛋白氨基酸残基一致,但其223位、236位、246位、466位、707位、711位氨基酸残基与FPVVP1蛋白的氨基酸残基一致,该病毒VP1蛋白序列表现出了过渡型序列特征,介于FPV与CPV间的过渡类型,这说明所分离病毒为蓝狐细小病毒(Blue fox parvovirus,BFPV),命名为BFPV-TA,蓝狐可能在CPV的起源过程起到重要的作用。; 刘海防胡传伟谢之景倪长鹏贾赟姜世金张兴晓杨笃宝; 关键词：VP1基因

蓝狐细小病毒VP2基因与NS1基因的克隆与序列分析被引量：2: 2009年; 根据GenBank上发表的犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）、猫细小病毒（Feline parvovirus,FPV）核酸序列,分别设计扩增VP2基因与NS1基因的特异性引物,采用PCR技术扩增蓝狐细小病毒（Blue fox parvovirus,BF-PV）泰安分离株（BFPV-TA）的VP2基因和NS1基因,将PCR产物克隆入pMD18-T载体,进行测序分析。结果显示,BFPV-TA VP2基因含有1个ORF,全长1 755 bp,共编码584个氨基酸,第219位氨基酸发生I→V（219I→V）改变,300G→P,411E→A;BFPV-TA NS1基因含有1个ORF,全长2 007 bp,共编码668个氨基酸,8个氨基酸残基发生改变,43R→H,135H→Y,172K→R,179A→E,350D→N,409I→V,574I→V,616D→V。BFPV-TA VP2基因与CPV和FPV参照株的同源性在98.4%~99.4%,BFPV-TA NS1基因与CPV和FPV参照株的同源性为98.6%~99.1%。VP2基因系统发生分析,BFPV-TA与FPV的亲源关系较为密切,但NS1基因系统发生分析,BFPV-TA成单独的分支。; 刘海防胡传伟谢之景倪长鹏贾赟姜世金张兴晓朱艳丽徐丽秋高玉峰; 关键词：VP2基因 NS1基因

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国家质检总局科技计划项目(2005IK047)