江苏省自然科学基金(BK2011209)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：吴连连胡安康朱孝荣袁红花陈仁金更多>>
- 相关机构：徐州医学院扬州大学更多>>
- 发文基金：江苏省青年科技基金江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定
- 2013年
- 利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究。根据GenBank中报道的皮蝇素A(Hydermin A,HA)一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91.2%、目的多肽分子量为28kD。将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体。采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28kD,与预测分子量相符。该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具。
- 袁红花王珍珍陈仁金胡安康张腾业吴连连冀德君朱孝荣
- 关键词：HA多肽多克隆抗体
- IGF-1通过PI3K/Akt信号通路诱导神经干细胞向神经元分化被引量：7
- 2014年
- 目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响,并探讨PI3K/Akt信号通路与之的关系。方法取新生C57BL/6J小鼠海马组织,分离、培养NSCs,将细胞团吹散,以1×104个/mL密度接种于24孔板,分别加入终浓度100 ng/mL的IGF-1和50μmol/L的PI3K/Akt通路特异抑制剂LY294002,根据处理的情况,将细胞分为IGF-1组、正常对照组、LY组和IGF-1+LY组。βⅢTubulin免疫荧光细胞化学染色法检测NSCs分化为神经元的情况,DAPI染核计细胞总数;p-Akt免疫荧光染色检测各组细胞Akt磷酸化的情况;Western blotting法检测Akt和p-Akt蛋白的表达量,并对各组进行比较。结果 IGF-1组NSCs向神经元分化的比率显著高于对照组、LY组和IGF-1+LY组(P均<0.05);免疫荧光染色结果显示,IGF-1组Akt磷酸化水平显著高于对照组、LY组和IGF-1+LY组(P均<0.05);Western blotting结果显示,IGF-1促进Akt磷酸化,LY294002抑制Akt的磷酸化。结论 IGF-1诱导Akt的磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,促进NSCs向神经元分化。
- 朱裕华袁红花吴连连胡安康陈仁金朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子1PI3KAKT信号通路神经干细胞分化
- ERK1/2信号通路在IGF-1诱导新生小鼠海马神经干细胞增殖分化中的作用被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)诱导新生小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化中的作用。方法:取新生C57BL/6J小鼠海马体外分离、培养NSCs,分别加入终浓度100 ng/ml的IGF-1和20μmol/L的抑制剂U0126。CCK-8试剂盒检测IGF-1对NSCs增殖的影响;免疫荧光细胞染色法检测IGF-1对细胞分化的影响;Western blot检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达,并对各组进行比较。结果:CCK-8测定细胞增殖,第3 d U0126组相对OD值显著低于IGF-1组,第7 d时IGF-1组OD值则显著高于对照组和U0126组(P<0.05)。倒置荧光显微镜下可观察到IGF-1组βⅢTubulin和GFAP阳性分化率均明显高于对照组和U0126组(P<0.05)。Western blot结果显示:IGF-1组蛋白表达量显著高于对照组和U0126组(P<0.05),IGF-1促进ERK磷酸化,U0126则抑制ERK的活化。结论:IGF-1可显著诱导NSCs的增殖和分化,ERK1/2信号通路可能具有重要作用,同时IGF-1可能参与ERK1/2的活化。
- 朱裕华胡安康陈仁金彭长凌吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：ERK1胰岛素样生长因子-1小鼠
- 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体的构建
- 2014年
- 为了构建牛皮蝇的皮蝇素A(hypodermin A,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1α-HAAcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA基因序列的上游加1段信号肽序列;通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP中,得到分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP;再利用脂质体法转染Cos7细胞,并以RT-PCR和Western-blot技术在RNA和蛋白水平上检测HA基因是否在Cos7细胞中表达。结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功;转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上能检测到HA基因的表达。说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体PEF1α-HA-AcGFP。
- 陈仁金胡安康王珍珍袁红花张腾业吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：牛皮蝇宿主真核表达载体HA基因基因表达
