国家自然科学基金(30801125)
- 作品数：13 被引量：41H指数：3
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- hIL-10基因修饰骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及机制研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究hII-10基因修饰的MSCs（骨髓间充质干细胞）对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及机制。方法RT-PCR克隆hIL-10基因并将构建慢病毒hIL-10／pLOX—cwGFPs，然后将慢病毒转导hII-10人豚鼠MSCs；ELlSA测定hIL-10-MSCs培养上清hIL-10含量；CCK-8法检测hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞对体外混合淋巴细胞培养的影响；ELISA测定其培养上清对外周血单个核细胞分泌IFN-Y的影响。结果成功构建慢病毒hIL-10／pLOX-ewGFP；hIL-10-MSCs培养上清的IL-10水平明显高于未转染（P〈O．05）；hlL-10-MSCs能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈O．05）；加入IL-2能逆转MSCs的抑制作用（P〈O．05）；hIL-10-MSCs培养上清组能抑制PHA刺激的PBMC分泌IFN-γ（P〈0．05）。结论hIL-10-MSCs对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用，能抑制PHA刺激的PBMC分泌IFN-γ。
- 牛坚刘斌张业伟李向农
- 关键词：T淋巴细胞免疫耐受
- 间充质干细胞在大鼠异种肝移植肝组织中的迁徙、定居及组织修复作用被引量：2
- 2011年
- 目的观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)在大鼠异种肝移植肝组织中的迁徙、定居及组织修复作用。方法分离培养、体外扩增豚鼠骨髓MSC,经4,6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)标记后用荧光显微镜进行体外示踪观察。制作豚鼠对Wistar大鼠的肝移植模型,DAPI标记的MSC经股静脉植入Wistar大鼠,用荧光显微镜观察术后12h、24hMSC在移植肝的迁徙及定居情况;采用苏木素-伊红(HE)染色观察移植肝组织的损伤情况。结果 DAPI标记MSC的标记率达100%,标记后MSC生长和增殖特性未受影响。MSC经股静脉注入后,12h即出现在移植肝,24h分布于移植肝血管及周围组织。显微镜下观察,空白对照组术后24h的肝小叶中央静脉和肝血窦淤血明显,肝细胞可见严重空泡状变性,坏死灶较多,肝组织中有较多中性粒细胞的聚集、浸润;MSC组肝小叶、中央静脉、汇管区结构清晰,炎症细胞浸润较轻。结论 MSC可以迁徙并定居于大鼠异种移植肝中,对移植肝组织损伤有修复作用。
- 牛坚翟振国刘斌张业伟
- 关键词：间充质干细胞迁徙肝移植
- 骨髓间充质干细胞诱导同种异体B细胞向CD5^+调节性B细胞转化体外实验被引量：1
- 2013年
- 目的研究骨髓间充质干细胞(BMSC)诱导高分泌IL-10的调节性B细胞(Breg)的产生及机制。方法采用成功分离的DA大鼠BMSC与Wistar大鼠B细胞共培养(BMSC+B)96h后,ELISA检测BMSC+B组细胞培养上清中IL-10的浓度和分泌细胞因子的变化,设单纯BMSC、单纯B细胞两组对照;流式细胞术分析B细胞表型的变化;通过加入中和抗体,观察细胞因子对BMSC诱导Breg细胞产生的影响。结果 BMSC+B组成功诱导产生高分泌IL-10的Breg细胞(P=0.006);Breg表型为CD19+CD1d+CD5+;IFN-β促进BMSC诱导Breg的产生(P=0.034)。结论 BMSC能诱导高分泌IL-10的CD5+Breg产生,该机制可能与BMSC自身分泌的IFN-β有关。
- 王月汪海军刘斌王学浩牛坚
- 关键词：骨髓间充质干细胞白细胞介素10调节性B细胞
- hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞的体外免疫抑制作用被引量：1
- 2009年
- 目的研究hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stam cell,MSC)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响。方法反转录PCR克隆hIL-10基因并构建慢病毒hIL-10/pLOX-CWgfp,然后将hIL-10/pLOX-CWgfp转入豚鼠MSC内;ELISA法测定hIL-10基因修饰的MSC(hIL-10-MSC)培养上清液内hIL-10含量;CCK-8法检测hIL-10-MSC和其培养上清液对体外混合淋巴细胞培养的影响。结果hIL-10-MSC培养上清液的hIL-10水平明显高于未转染hIL-10者(P<0.05);hIL-10-MSC能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05);加入IL-2能逆转MSC的抑制作用(P<0.05);hIL-10-MSC培养上清液能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05)。结论hIL-10-MSC和其培养上清液对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用。
- 牛坚刘斌张业伟李向农
- 关键词：白细胞介素10T淋巴细胞免疫耐受
- 输注转染人白细胞介素10基因的骨髓间充质干细胞对移植肝的保护作用被引量：1
- 2012年
- 目的研究输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞(hIL-10-MSC)对大鼠原位异种肝移植后移植肝的保护作用及机制。方法建立豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植模型,受体分为3组:空白对照组、骨髓间充质干细胞(MSC)对照组、hIL-10-MSC组。术后12h取移植肝,HE染色观察移植肝组织形态学变化,用RT-PCR、蛋白质印迹法观察移植肝组织IL-10、穿孔素、颗粒酶B的表达情况。结果与空白对照组、MSC对照组相比,hIL-10-MSC组大鼠移植肝排斥反应最轻,穿孔素、颗粒酶B的表达明显降低,而IL-10的表达显著升高(均P<0.05)。结论 hIL-10-MSC对移植肝的保护作用可能与其减少穿孔素/颗粒酶B的表达有关。
- 牛坚张业伟刘斌
- 关键词：白细胞介素10穿孔素颗粒酶
- 携带hIL-10基因慢病毒的构建和在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 牛坚刘斌张业伟李向农
- 关键词：干细胞HIL-10
- hIL-10基因修饰骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠排斥反应的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对大鼠原位异种肝移植排斥反应的影响及机制。方法利用两套管吻合技术行豚鼠对Wistar大鼠的非协调性异种原位肝移植构建模型,按照构建模型过程中处理方式的不同(生理盐水+地塞米松、MSC+地塞米松、hIL-10-MSC+地塞米松)分为空白对照组、MSC组、hIL-10-MSC组。观察受鼠存活时间、肝功能、术后24h移植肝组织IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18及TNF-α的含量及其mRNA表达。结果与空白对照组、MSC组相比,hIL-10-MSC组大鼠生存时间延长、肝功能好转,细胞因子IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、TNF-α表达明显降低,IL-4、IL-10表达显著升高(P<0.05)。结论hIL-10-MSC对移植肝保护作用可能与其抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、TNF-α细胞因子的表达,促进细胞因子IL-4的表达有关。
- 牛坚刘斌张业伟李向农
- 关键词：白细胞介素-10肝移植免疫耐受
- 输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨转染人白细胞介素10（Hil-10）基因的骨髓间充质干细胞（MSC）对大鼠异种移植肝脏细胞凋亡的影响.方法 以携带Hil-10基因的慢病毒Hil-10/LOX-cwGFP转染豚鼠的MSC.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,利用两套管法行原位肝移植.空白对照组的受者分别于术前24 h和术后24 h经股静脉注射生理盐水2 ml＋地塞米松0.5 ml（2 mg/ml）各1次;MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的MSC单细胞悬液2 ml＋地塞米松0.5 ml（2mg/ml）各1次;Hil-10-MSC组的受者分别于上述时间点自股静脉注射2.0×106/ml的Hil-10-MSC单细胞悬液2 ml＋地塞米松0.5 ml（2 mg/ml）各1次.术后12 h切取移植肝脏,观察移植肝组织学变化,测定肝组织中Hil-10、凋亡蛋白酶-3（Caspase-3）、Fas和FasL的表达,观察肝细胞的凋亡情况.结果 与空白对照组、MSC组相比,Hil-10-MSC组的病理改变最轻,IL-110表达明显增加,FasL明显减少.Hil-10-MSC组的Fas和Caspase-3的阳性区域面积分别为11.5%和25.1%,明显低于空白对照组的35.3%和70.8%（P＜0.05）.Hil-10-MSC组的凋亡指数为32.5%,明显低于空白对照组的74.1%和MSC组的50.3%（P＜0.05）.结论 Hil-10-MSC可明显减轻大鼠异种移植肝脏的细胞凋亡,其机制可能与其抑制Fas/FasL的表达有关.
- 牛坚刘斌张业伟李向农
- 关键词：间质干细胞白细胞介素10细胞凋亡
- 骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及其机制
- 2008年
- 目的研究骨髓间充质干细胞（MSCs）对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及其机制。方法采用密度梯度离心法分离豚鼠MSCs；免疫组织化学法检测MSCs膜表面CIN5和CD44的表达；流式细胞术检测MSKCs周期；CCK-8法检测和绘制MSCs的生长曲线；观察MSCs和其培养上清对体外异种淋巴细胞混合培养的影响。结果MSCs膜表面CIN5表达阴性、CIN4表达阳性；分析MSCs周期显示，MSCs中20％左有处于S期、G2期和M期，其余80％左右均处于G0期和G1期。MSCs和其培养上清均能明显抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈0．05），加入白细胞介素2（IL2）能逆转MSCs的抑制作用（P〈0.05）。结论MSCs的鉴定可根据细胞形态，膜表面标志物来确定。MSCs及其培养上清对异种淋巴细胞混合培养的增殖反应有显著的抑制作用。
- 牛坚刘斌张业伟徐为李向农
- 关键词：间质干细胞T淋巴细胞
- 豚鼠至大鼠异种肝移植手术操作要点及体会被引量：1
- 2011年
- 目的建立稳定的豚鼠至大鼠的异种肝移植模型。方法在传统"二袖套"法基础上进行改良,并分预实验和正式试验两组进行手术时间和手术成功率的比较。结果实验通过改良型二袖套法进行肝移植手术80对,预实验手术25对,成功率68%,正式手术35对,成功率89%,显著高于预实验(P<0.05),而手术时间明显低于预实验(P<0.05)。结论改进的异种肝移植术操作简便,随着手术者经验的提高可明显提高手术成功率,可作为异种肝移植实验可靠的动物模型制作。
- 翟振国牛坚刘斌魏鑫
- 关键词：异种肝移植二袖套法
