国家自然科学基金(30801105)
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
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- 骨桥蛋白在不同胆汁体系中的成核作用研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）在不同胆汁体系中的成核作用，研究其与胆结石形成的关系。方法应用成核时间实验检测OPN在模拟胆汁及人胆汁中的成核时间。胆固醇结晶生长实验检测OPN对模拟胆汁胆固醇结晶生长的影响，电镜观察OPN对模拟胆汁及人胆汁中胆汁泡的影响，并检测胆结石患者胆汁和正常胆汁中OPN和钙离子的浓度。结果OPN在模拟胆汁及人胆汁中均可延长胆固醇成核时间，其作用具有剂量依赖性并和钙离子相关（P〈0.05）。50μg／ml和100μg／ml的OPN分别使结石胆汁的成核时间延长1．50倍和1．93倍（P〈0．01）；使正常胆汁的成核时间延长1．17倍和1．33倍（P〈0．01）；使模拟胆汁的成核时间延长1．29倍和1.48倍（P〈0．01）。在模拟胆汁中，OPN可抑制胆固醇结晶生长，延缓胆固醇结晶出现，使胆固醇成核时间指数和胆固醇结晶生长指数延长，并可抑制由钙离子诱导的促成核效应。电镜观察发现OPN可使胆固醇～磷脂泡更加稳定，抑制泡的动态变化及胆固醇析出。结石胆汁中OPN[（0．53±0．08）mg／ml比（0．65±0．14）mg／ml，P〈0．05]和钙离子浓度均低与对照组[（0．71±0．17）mmol／L比（0．84±0．08）mmol／L，P〈0．05]。结论OPN在不同胆汁体系中均可抑制胆固醇成核，从而抑制胆固醇结石形成。
- 陈进宏杨林蔡端王丽颖查锡良
- 关键词：胆结石骨桥蛋白成核作用胆汁
- 骨桥蛋白与结石被引量：3
- 2011年
- 胆汁和尿液中均存在大量具有促成核效应和抑成核效应的蛋白质,研究表明这些蛋白质间的平衡失调是胆结石及尿路结石形成的始动因素和促进因素。因此,对这些蛋白质结构、功能的研究,将有助于阐明结石病的发病机制,从根本上预防结石病的发生。
- 郭满陈进宏
- 关键词：骨桥蛋白肾结石胆结石
- 小鼠骨桥蛋白(OPN)基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体内抑制效果鉴定
- 2012年
- 目的构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果。方法参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA重组体。经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液。经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Western blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果。结果成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109 TU/mL病毒原液。与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别。结论利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型。为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具。
- 郭满林晶陈进宏蔡端
- 关键词：慢病毒载体小鼠
- 骨桥蛋白在胆固醇结石患者胆汁中的表达及成核作用研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨骨桥蛋白在人胆固醇结石形成中的作用。方法36例胆固醇结石患者为结石组，19例肝移植供体为正常组，分别测定骨桥蛋白、钙离子及脂质成分在胆囊胆汁中的含量，用成核时间法研究骨桥蛋白在胆汁中的成核作用。结果骨桥蛋白呈剂量依赖性地抑制胆固醇自发成核。50yg／ml的骨桥蛋白可分别使结石组和正常组胆汁的成核时间延缓48．90％和17．07％，100pLg／ml的骨桥蛋白可使成核时间延缓91．51％和32．93％；并可抑制钙离子诱导的促成核作用。50tLg／ml骨桥蛋白＋钙离子可分别使结石组和正常组胆汁成核时间延缓75．78％和33．96％，而100ug／ml骨桥蛋白＋钙离子则使成核时间分别延缓125．90％和62．26％。结石组胆汁中胆固醇、磷脂、胆汁酸及胆固醇饱和指数均显著高于正常组胆汁（P〈0．05），而骨桥蛋白和钙离子含量则明显低于正常组胆汁中的含量（P〈0．05）。结论骨桥蛋白可抑制胆固醇成核，并参与胆结石的发生发展。
- 杨林陈进宏蔡端王丽颖查锡良
- 关键词：骨桥蛋白胆固醇结石胆汁成核作用
