国家高技术研究发展计划(2009AA10Z110)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：杨涵江张智英张婷婷任充华李宁更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 动物转基因研究及其应用被引量：7
- 2010年
- 回顾了动物转基因研究的发展历程,综述了现有的转基因方法,并简要介绍了该技术给农业、生物医药、环境保护、生物材料、生物反恐等领域带来的新变化,同时,展望了转基因动物的发展前景。
- 刘燊李宁
- 关键词：转基因技术转基因动物生物育种生物医药
- 人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装被引量：3
- 2012年
- 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。
- 任充华张婷婷杨涵江王昕陈知龙张智英
- 关键词：重组腺病毒细胞永生化
- PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测
- 2012年
- 【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。
- 张婷婷辛颖张志强任充华杨涵江王令张智英
- 关键词：SV40PIGGYBAC转座子
