国家重点基础研究发展计划(2003CB51550)
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
- 相关作者：周鸿敏周洁唐莉王雪琼阎冀焕更多>>
- 相关机构：华中科技大学吉林医药学院中国科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的克隆血红素氧合酶-1(HO-1)基因,并构建真核表达载体,建立重组HO-1蛋白的血管内皮表达细胞系。方法从大鼠脾脏中提取RNA,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),克隆到鼠的HO-1基因,并对该基因片段进行T载体克隆、酶切鉴定和测序分析。将HO-1基因插入到真核表达载体pcDNA3中,利用脂质体介导将重组质粒转染血管内皮细胞ECV304细胞,经G418加压筛选后,对细胞进行间接免疫荧光和Western blot分析。结果DNA测序分析表明克隆的HO-1基因与文献报道一致,酶切鉴定证实基因正确地插入表达载体中。经间接免疫荧光和Westernblot表明重组HO-1蛋白在ECV304细胞中获得高效表达,其分子量约为32 kD。结论HO-1基因真核表达载体的成功构建和重组HO-1蛋白在血管内皮细胞系中的高效表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 杜敦峰昌盛陈必成周鸿敏陈忠华
- 关键词：血红素氧合酶-1分子克隆血管内皮细胞基因表达
- 雌激素对同种抗原刺激T细胞反应的影响被引量：9
- 2006年
- 目的研究雌激素(E2)对同种抗原刺激T细胞反应的影响,及其与Th1/Th2细胞因子间的关系。方法利用单向混合淋巴细胞培养体系,以C57BL/6小鼠脾细胞作为反应细胞,分别用经丝裂霉素C处理的Balb/C小鼠脾细胞(实验组I)和ConA(实验组II)作为刺激原活化T细胞,未加刺激原为空白组,同时加入妊娠水平的E2进行共培养,未加E2为对照组。72h后,采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测各组细胞培养上清液中Th1型细胞因子(TNF-α)及Th2型细胞因子(IL-10)的表达水平。结果与空白组(1.49pg/mL)相比,实验组I与实验组II分泌IL-10均增高(27.69pg/mL和26.28pg/mL,P<0.01),实验组II分泌TNF-α浓度为28.82pg/mL,与空白组相比,TNF-α水平下降(P<0.05),提示T细胞反应向Th2偏移;在给予E2共培养后,IL-10水平均进一步显著增高(37.02pg/mL和39.58pg/mLP<0.01);而实验组I和实验组II中TNF-α浓度与对照组相比均进一步降低(23.55pg/mL和21.86pg/mL,P<0.05);在无刺激原存在条件下,E2亦可使T细胞分泌TNF-α水平明显降低(P<0.01),而且实验组I和实验组II相比,E2使T细胞分泌TNF-α水平的降低及IL-10水平的增高无显著差异(P>0.05)。结论雌激素体外刺激可使同种抗原活化的T细胞分泌IL-10增多,同时下调TNF-α,即导致T细胞反应向Th2偏移。而且雌激素对TNF-α的下调作用与T细胞活化无明显相关。
- 王雪琼周鸿敏阎冀焕袁劲周洁唐莉陈忠华
- 关键词：雌激素TNF-ΑIL-10
- 环孢霉素A对OVA免疫TCR转基因DO11．10小鼠CD4^＋CD25^＋T细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:研究免疫抑制剂CsA对处于免疫应答状态的小鼠脾脏调节性CD4+CD25+T细胞影响。方法:采用流式细胞术检测卵白蛋白(OVA)免疫的DO11.10小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及其中Foxp3+T细胞的变化。结果:OVA免疫后脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞百分数及Foxp3+T细胞占CD4+CD25+T细胞百分数均增加,显示CsA可明显减少正常及免疫应答状态下小鼠脾脏CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分数。结论:CsA在抑制免疫应答的同时也可能抑制了免疫耐受的诱导。
- 王弘珺马海霞李质馨赵勇
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞CSAOVA
