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β联蛋白对体外过氧化氢所致人皮肤成纤维细胞衰老表型的影响被引量：3: 2013年; 目的观察高表达的D联蛋白对体外过氧化氢（H2O2）所致正常人皮肤成纤维细胞（NHSF）衰老表型的影响。方法NHSF分别转染pcDNA3．1-β联蛋白或空载体pcDNA3．1，然后150μmol／LH2O2处理2h。实验分为转染H2O2处理组（NHSF＋β联蛋白＋H2O2）、转空载体H2O2处理组（NHSF＋空载体＋H2O2）以及转空载体组（NHSF＋空载体）。用RT—PCR和Western印迹分析β联蛋白的表达，显微镜观察细胞形态，试剂盒检测衰老相关的β半乳糖苷酶（SA—β—gal）、细胞活性氧（ROS）以及超氧化物歧化酶（SOD）的活性。所有数据均用SPSS13．0软件进行统计分析，多组间比较采用ANOVA检验。结果pcDNA3．1-β联蛋白明显上调了NHSF中β联蛋白的表达。NHSF＋空载体＋H2O2组β联蛋白mRNA和蛋白水平（与GAPDHmRNA和蛋白的比值分别为0．2900±0．0195和0．3130±0．0171）明显低于NHSF＋空载体组（分别为0．5963±0．0400和0．6190±0．0090），两组比较，均P〈0．05；NHSF＋β联蛋白＋H2O2组β联蛋白表达水平（0．7953±0．0074）高于NHSF＋空载体＋H2O2组（P〈0．05）。SA—β—gal染色率在NHSF＋空载体组、NHSF＋空载体＋H2O2组、NHSF＋β联蛋白＋H2O2组分别为（2．9667±0．2517）％、（37．70±0.9539）％、（29．330±0．6359）％，各组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。NHSF＋空载体、NHSF＋空载体＋H2O2、NHSF＋β联蛋白＋H2O2组ROS活性分别为（50．9963±9．2688）％、（109．9190±11．5215）％、（75．1063±3．0138）％，SOD水平分别为（88．0856±3．9181）、（35．5585±3．4438）、（61．7029±3．1716）U／mg，各组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论高表达的β联蛋白能够抑制细胞衰老相关β-半乳糖甘酶（SA-β-gal）和细胞活性氧（ROS）的表达，同时上调了SOD的活性。; 田黎明谢红付李吉杨婷胡威彭圆; 关键词：Β连环素过氧化氢成纤维细胞氧化性应激细胞衰老

β-catenin在不同年龄人群非曝光部位皮肤组织中的表达及意义被引量：1: 2013年; 目的检测β-catenin在不同年龄人群非曝光部位皮肤组织中mRNA和蛋白的表达水平,初步探讨β-catenin在人皮肤年代老化过程中的意义。方法收集62例急腹症手术患者非曝光部位的皮肤标本,根据年龄分为三组:即青年组(<20岁)、中年组(30~45岁)和老年组(>65岁),用RT-PCR及Western blot检测每例皮肤组织中β-catenin mRNA和蛋白的表达量,分析不同年龄组之间β-catenin表达水平的差异。结果青年组、中年组和老年组β-catenin/GAPDH mRNA的表达水平分别是0.603 8±0.012 1,0.513 9±0.015 4和0.256 2±0.011 4,三组间比较的差异均有统计学意义(P<0.01),青年组与中年组,青年组与老年组,中年组与老年组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);青年组、中年组和老年组β-catenin/GAPDH蛋白的表达水平分别是0.631 5±0.013 5,0.548 6±0.012 9和0.327 4±0.021 9,三组间比较差异均有统计学意义(P<0.01),青年组与中年组,青年组与老年组,中年组与老年组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论随着年龄的增长β-catenin的表达水平随之减少,推测人皮肤年代老化可能与β-catenin的表达下调有一定的关联性。; 田黎明谢红付杨婷李吉胡威彭圆; 关键词：Β-CATENIN 皮肤

衰老标记蛋白30对过氧化氢所致人皮肤成纤维细胞衰老表型的影响被引量：6: 2016年; 目的观察高表达的衰老标记蛋白30(SMP30)对过氧化氢(H_2O_2)所致的正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老表型的影响。方法实验分为转染H_2O_2处理组(NHSF+SMP30+H_2O_2组)、转空载体H_2O_2处理组(NHSF+空载体+H_2O_2组)和转空载体组(NHSF+空载体组)。NHSF细胞分别转染人SMP30 c DNA或空载体pc DNA3.1(分别命名为NHSF+SMP30、NHSF+空载体),然后150μmol·L-1H_2O_2处理2 h。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法分析SMP30的表达,显微镜观察细胞形态,并检测与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)、细胞活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果人SMP30 c DNA明显上调了NHSF中SMP30的表达。NHSF+空载体+H_2O_2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平明显低于NHSF+空载体组(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组SMP30 mRNA和蛋白表达水平高于NHSF+空载体+H_2O_2组(P<0.05)。NHSF+空载体+H_2O_2组较NHSF+空载体组SA-β-gal染色率明显增高(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组较NHSF+空载体+H_2O_2组SA-β-gal染色率明显下降(P<0.05)。NHSF+空载体+H_2O_2组较NHSF+空载体组ROS活性明显增高(P<0.05),而SOD水平明显降低(P<0.05);NHSF+SMP30+H_2O_2组较NHSF+空载体+H_2O_2组ROS活性明显下降,而SOD水平明显上升(P<0.05)。结论高表达的SMP30能够抑制细胞SA-β-gal和ROS的表达,同时上调SOD的活性。; 田黎明彭圆胡荣毅张平姜红浩许斌田庆均张翀王平; 关键词：过氧化氢成纤维细胞氧化应激细胞衰老

高表达β-catenin对中波紫外线所致人皮肤成纤维细胞衰老相关因子FOXO3a表达的影响被引量：2: 2018年; 目的:探讨高表达β-联蛋白(β-catenin)对中波紫外线所致人皮肤成纤维细胞衰老相关因子FOXO3a表达的影响。方法:组织分离法培养正常人皮肤成纤维细胞(NHSFs),pcDNA3.1-β-catenin转染NHSFs,并用中波紫外线(UVB)进行氧化应激处理,流式细胞术检测NHSFs增殖与凋亡,Western印迹测定NHSFs中β-catenin和FOXO3a蛋白的表达。结果:pcDNA3.1-β-catenin明显上调了NHSFs中β-catenin的表达,降低细胞凋亡率,同时高表达的β-catenin激活了FOXO3a,上调了FOXO3a的表达。β-catenin/GAPDH蛋白的比值在NHSFs+vector,NHSFs+vector+UVB,NHSFs+β-catenin+UVB组分别是:0.63±0.03、0.21±0.18、0.47±0.09;FOXO3a/GAPDH蛋白的比值在NHSFs+vector,NHSFs+vector+UVB,NHSFs+β-catenin+UVB组分别是:0.89±0.59、0.24±0.02、0.48±0.76。结论:高表达的β-catenin可以降低细胞凋亡率,抑制细胞衰老,其作用机制可能是通过上调衰老相关因子FOXO3a表达。; 陈用军石年刘晓明杨婷田黎明; 关键词：人皮肤成纤维细胞中波紫外线细胞衰老 FOXO3A

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湖北省自然科学基金(2012ffc83)

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