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TGF-β1经DNMT1调控肺癌A549细胞对顺铂的敏感性被引量：1: 2014年; 转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)与肿瘤的发生、发展以及凋亡关系密切,DNA甲基化关键酶DNMTs(DNA methyltransferases)在肿瘤发生及耐药中发挥重要作用,SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine)常因异常甲基化而表达下调。为探究肺癌对顺铂耐受的分子机制,该研究以肺腺癌A549细胞为研究对象,通过外源TGF-β1作用A549细胞,利用RT-PCR检测TGF-β1作用后DNMTs和SPARC m RNA水平的变化以及A549细胞增殖能力和对顺铂敏感性的影响。结果显示:5 ng/m L、10 ng/m L TGF-β1作用24 h后,A549细胞DNMT1 m RNA表达均显著下调(P<0.01、P<0.001),SPARC m RNA表达均显著上调(P<0.001、P<0.001);5 ng/m L、10 ng/m L TGF-β1作用后的A549细胞对顺铂的IC50均显著低于对照组[(12.34±0.36)μmol/L、(10.93±0.69)μmol/L,对照组为(21.54±1.21)μmol/L;P<0.01、P<0.01];5 ng/m L、10 ng/m L TGF-β1作用后的A549细胞在顺铂环境中,其克隆数显著低于空白对照;15μmol/L顺铂作用24 h时,5 ng/m L、10 ng/m L TGF-β1组细胞凋亡分数均显著高于空白对照(P<0.05、P<0.01)。结果提示:TGF-β1可下调A549细胞DNMT1的表达,进而上调抑癌基因SPARC并增加其对顺铂的敏感性,成功逆转肺腺癌A549细胞的恶性表型。该研究为进一步阐明肺癌对顺铂的耐受机制提供了新的思路。; 李德涛吴艳凤薛成军侯玉磊陈辉; 关键词：TGF-Β1 DNMT1 A549细胞顺铂

ETV4在乳腺癌中的表达及其与血管生成的关系被引量：1: 2014年; 目的探讨ETS变异体(ETV)4在乳腺癌组织中的表达及与临床特征和血管生成的关系。方法选取乳腺癌术后组织标本97例,应用免疫组织化学染色法检测ETV4表达情况;用CD34标记微血管内皮细胞,采用Weidner计数法计算乳腺癌组织的微血管密度(MVD);分析ETV4与乳腺癌患者的临床特征、MVD间的关系,并探讨ETV4与乳腺癌现有病理指标雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER2/neu、Ki-67之间的关系。结果 ETV4主要在癌细胞核中表达,在正常乳腺组织和癌旁组织中则呈阴性表达;不同临床特征(瘤体大小、是否存在淋巴结转移)的乳腺组织ETV4表达强度有统计学差异(P<0.05),并与病理学分级和TNM分期存在正相关(r=0.316,P<0.01;r=0.255,P<0.05)。ETV4的表达与MVD呈显著性正相关(r=0.247,P<0.01),并与HER2/neu和Ki-67的表达也呈正相关(r=0.241,P<0.05;r=0.253,P<0.05),但与ER和PR的表达不相关(P>0.05)。结论 ETV4与乳腺癌的临床特征和微血管生成有重要关系。; 薛成军文娟娟刘艺陈治水袁蓉王勇军崔丽娟陈辉; 关键词：乳腺癌微血管密度

RASSF1A逆转A549-DDP细胞对顺铂耐受的实验研究: 2013年; RASSF1A表达下降可能是肺癌对顺铂获得性耐药的主要因素之一。为了寻找预测顺铂对肺腺癌A549细胞化疗敏感性的生物标志,该研究以对顺铂耐药的同源A549细胞(A549-DDP)为研究对象,利用转染技术上调RASSF1A表达。RT-PCR和Western blot检测转染前后RASSF1A在mRNA和蛋白水平的表达情况。在不同浓度顺铂作用下,通过MTT法、克隆形成实验检测转染前后细胞活力并计算IC50和计数克隆形成数。在同一浓度顺铂作用下,流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡分数的改变。结果显示:顺铂作用24 h后,转染RASSF1A表达质粒的A549-DDP细胞对顺铂IC50明显低于A549-DDP细胞[(39.9±6.3)μmol/L vs(53.0±5.8)μmol/L,P=0.036];不同浓度顺铂连续作用5天后,转染RASS-F1A表达质粒的A549-DDP细胞形成的克隆数明显少于A549-DDP细胞组;在同一浓度顺铂作用下,转染RASSF1A表达质粒的A549-DDP凋亡分数明显大于A549-DDP细胞[(7.10±0.01)%vs(3.80±0.18)%,P=0.002]。结果提示,RASSF1A表达下降可能是肺腺癌A549细胞对顺铂获得性耐药的重要因素之一,RASSF1A表达在临床上作为肺癌患者顺铂化疗耐受的生物标志值得进一步研究。; 侯玉磊吴艳凤薛成军李凤增罗海霞郑倩陈辉; 关键词：肺癌A549 顺铂

DNMT3a表达上调与A549细胞对顺铂耐受关系的实验探究被引量：2: 2013年; 基因甲基化状态改变是肿瘤获得性耐药产生的重要途径之一。DNMTs是基因甲基化的重要调节因子。为了寻找预测肺腺癌A549细胞对顺铂敏感性的生物标志,该研究以A549细胞和对顺铂耐受的同源A549细胞(A549-DDP)为研究对象,利用质粒转染技术上调A549细胞DNMT3a表达,通过RT-PCR检测转染前后DNMT3a在mRNA水平的表达情况。在不同浓度顺铂作用下,通过MTT法、克隆形成实验检测转染前后细胞增殖率并计算IC50和计数细胞克隆形成数。在相同顺铂浓度作用下,流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡分数的改变。结果显示:顺铂作用24 h后,转染DNMT3a表达质粒的A549细胞对顺铂IC50明显高于A549细胞[(9.19±0.91)μmol/L vs(4.96±0.58)μmol/L,P=0.000],转染后的细胞凋亡率明显低于未转染细胞[(1.33±0.38)%vs(5.22±0.67)%,P=0.039];不同浓度顺铂连续作用5 d后,转染DNMT3a表达质粒的A549细胞形成的克隆数均明显高于A549细胞组。结果提示,DNMT3a表达上调是肺腺癌A549细胞对顺铂获得性耐受的重要原因之一。检测肺癌患者血清DNMT3a水平作为预测肺癌患者对顺铂敏感性的生物标志值得进一步研究。; 吴艳凤侯玉磊薛成军李德涛郑倩陈辉; 关键词：非小细胞肺癌 A549细胞株顺铂化疗耐受

肺癌患者血清TGF-β_1浓度检测及临床意义分析被引量：2: 2012年; 目的探讨检测肺癌患者血清中转化生长因子β1(transforming growth factorβtype1,TGF-β1)的临床应用价值。方法收集98例肺癌患者血清标本及40例健康对照者血清标本,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组标本血清TGF-β1浓度。分析二者之间的差异及其与肺癌患者临床特征之间的关系。结果肺癌患者的血清TGF-β1浓度明显高于健康对照者,差异有统计学意义(66 848 pg/mL±37 178 pg/mL vs 48 790 pg/mL±23 111 pg/mL,P<0.01);肺癌患者血清TGF-β1浓度与TNM分期,淋巴结转移,病理分型无相关性(P>0.05);手术前后,化疗前后血清TGF-β1浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清TGF-β1对肺癌的辅助诊断有一定的临床价值。; 李程华侯玉磊陈辉; 关键词：血清肺癌肿瘤标志物

DNMT3a基因shRNA质粒表达载体的构建及其沉默作用: 2015年; 目的以DNMT3a mRNA保守序列为靶基因设计针对DNMT3a mRNA的siRNA序列和无效干扰对照序列(HK),并利用基因重组技术将其克隆到真核表达载体p Gensil-1中,构建p Genesil-1-DNMT3a-shRNA、p Genesil-1-HK-shRNA重组质粒。方法应用转化技术将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中,通过卡那霉素抗性筛选出阳性菌落后提取质粒进行酶切和测序鉴定,应用质粒转染技术转染耐顺铂肺腺癌A549细胞(A549-DDP),利用RT-PCR技术检测转染重组质粒24、48、72 h后DNMT3a的沉默效率。结果测序结果与合成序列一致,重组质粒不能够被PstⅠ切开,转染p Genesil-1-DNMT3a-shRNA能够明显抑制DNMT3a的表达,抑制率分别达到25.5%,56.2%,63.4%,且呈明显时间依赖性,而p Genesil-1-HKshRNA无明显抑制作用。结论成功构建了DNMT3a基因shRNA及HK质粒真核表达载体,为进一步实验研究奠定了基础。; 吴艳凤李德涛郑倩李雪薛成军陈辉; 关键词：RNA干扰重组质粒

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重庆市自然科学基金(cstc2012jjA10105)

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