国家自然科学基金(30871859)
- 作品数：13 被引量：104H指数：6
- 相关作者：刘长明危艳武黄立平郭龙军吴洪丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技支撑计划更多>>
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- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HBR株不同代次水平的毒力比较试验
- 2012年
- 为了阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR毒株在体外传代过程中发生的毒力及遗传变异情况,采用第5、10和125代PRRSV-HBR株病毒进行了人工感染试验。结果显示,低代次(第5和第10代)病毒接种组可复制出以"高热综合征"为特点的症候群,第5代毒株感染组死亡率达40%(2/5),第10代感染组症状明显减轻且无死亡,第125代毒株感染组基本无临床症状。这3个代次的毒株感染组于感染后第3天检测病毒血症呈阳性,第7～14天到达高峰,第125代于第21天消失,较第5和10代毒株提前1周。病毒感染后抗原主要分布于脾、扁桃体、淋巴结等组织,第5和10代毒株感染组脏器出现严重的病理损伤,第125代毒株感染组仅见轻微病理损伤。对3个代次毒株的ORF5、ORF6和ORF7测序显示,仅在ORF5出现了3个氨基酸位点突变,即第29位:第5、第10代的缬氨酸到了第125代变为丙氨酸;第32位:第5、第125代的丝氨酸到了第10代变为甘氨酸;第196位:第5、第10代的谷氨酰胺到了第125代变为精氨酸。研究表明,低代次毒株能够完全复制出典型的"猪高热综合征",而高代次毒株无明显临床症状,证明该毒株经细胞传代后毒力下降。高代次毒株感染动物仍能够引起毒血症和持续感染的结果表明,高代次毒株仍具一定毒力,作为疫苗种毒需要进一步毒力弱化。
- 危艳武范培虎郭龙军吴洪丽刘长明沈荣显
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒力比较
- 猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒混合感染的检测及TTV遗传变异分析被引量：5
- 2011年
- 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,本研究采用PCR方法对采自14个省280份病料样品进行检测,结果显示,TTV1和TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1与TTV2混合感染率为18.2%;PCV1和PCV2阳性率分别为41.1%和37.5%,PCV1与PCV2混合感染率为19.6%;PCV2阳性样品中TTV1和TTV2混合感染率达75.0%。此外,对2株TTV1基因组进行测序,与GenBank中登录的6个TTV1序列比对,相似性结果为67.3%～95.1%;对4株TTV2基因组测序,与GenBank登录的4条TTV2序列比对,相似性为84.7%～90.4%;将TTV1与TTV2进行序列比对,相似性仅为44.0%。TTV1和TTV2基因高变区分别位于520 nt～2 594 nt和720 nt～2 170 nt;TTV1基因保守区位于1 nt～520 nt和2 595 nt～2 800 nt;而TTV2基因保守区位于1 nt～719 nt和2 171 nt～2 800 nt。以上结果表明,我国猪群中存在TTV与PCV2的混合感染,并且两种病毒混合感染引起的相关疾病可能存在协同致病性;TTV1和TTV2基因型差异较大,具有遗传变异多样性的特点。
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：猪圆环病毒遗传变异分析
- 检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用
- 利用抗PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种阻断ELISA方法,用于检测猪血清中PCV2中和抗体。该方法将PCV2多克隆抗体包被ELISA板以捕获已知病毒抗原,以辣根过氧化物酶标记的单抗为指示抗体,通过测定该酶标...
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军
- 关键词：猪圆环病毒2型单克隆抗体阻断ELISA
- 文献传递
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究被引量：10
- 2012年
- 【目的】为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。【方法】选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRRSV顺序共感染组、HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组、HP-PRRSV+PCV2同时共感染组、HP-PRRSV感染组、PCV2感染组、未接种对照组。感染后每天测量体温、观察临床症状,每周称量体重、采血。用流式细胞仪检测血液中的CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、γδT、NK细胞及粒细胞和单核细胞变化;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测这两种病毒抗体变化;用ELISA法检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-2、GM-CSF细胞因子变化;用荧光定量PCR法检测血清和组织中病毒载量。对各组试验猪进行组织病理学观察。【结果】HP-PRRSV/PCV2顺序共感染组临床症状最严重,死亡率达60%;组织和血清中病毒载量显著高于其它组,抗体滴度明显低于其它组;淋巴细胞亚群及细胞因子(尤以TNF-α)变化也最为明显。【结论】HP-PRRSV和PCV2之间存在协同致病作用,且猪群先感染HP-PRRSV后感染PCV2可明显提高猪群发病率和死亡率。本研究对临床HP-PRRSV和PCV2的综合防制提供科学依据。
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染的检测及TTV遗传变异分析
- 为了解我国猪群中猪输血传播病毒(TTV)与猪圆环病毒(PCV)混合感染情况,采用PCR法对来自14个省份280份送检病料进行了检测,TTV1与TTV2阳性检出率分别为51.8%和28.2%,TTV1和TTV2混合感染阳性...
- 刘建波郭龙军危艳武黄立平吴洪丽刘长明
- 关键词：TTVPCV遗传变异分析
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位信号区抗原表位的鉴定被引量：15
- 2010年
- 【目的】猪圆环病毒2型(PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的重要病原,其基因组ORF2编码的Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,起保护性抗原作用,对其进行抗原表位鉴定十分必要。【方法】本研究采用杆状病毒表达的重组Cap蛋白作为免疫原制备5株单克隆抗体,通过原核表达系统对ORF2基因进行了截短表达,先行对Cap蛋白抗原表位进行宽幅定位,然后利用合成多肽对Cap抗原表位做精确扫描定位。【结果】5株单抗中有4株针对同一抗原表位,坐落在Cap蛋白N末端核定位信号区,经多肽扫描证实,核心序列为26RPWLVHPRHRY36;另1株单抗(1D2)仅与重组Cap蛋白产生免疫活性反应,对4个分段截短表达的Cap蛋白无免疫活性反应,鉴于该单抗具有中和病毒活性,针对的可能是构象表位。【结论】本研究首次鉴定出位于Cap蛋白核定位信号区的一个抗原表位,为以后Cap蛋白功能及核定位机理的研究奠定基础。
- 郭龙军陆月华黄立平危艳武刘长明
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白抗原表位核定位信号
- 高致病性PRRSV与PCV2共感染协同致病性研究
- 为阐明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的协同致病作用,澄清两种病毒不同时间顺序共感染与其协同致病力之间的关系。选取35日龄阴性健康猪30头,随机分6组,PCV2/HP-PRR...
- 范培虎危艳武郭龙军吴洪丽黄立平刘长明
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 文献传递
- 猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验被引量：5
- 2012年
- 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗。选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒。攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化。采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1∶200～1∶800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高。2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护。以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株。病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤。本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护。
- 付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：交互免疫
- 猪圆环病毒2a和2b亚型灭活疫苗及亚单位疫苗的交互免疫研究
- 为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫效果,本研究采用PCV2a-LG和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-...
- 付玉洁郭龙军黄立平危艳武唐青海吴洪丽刘长明
- 关键词：交互免疫
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用被引量：15
- 2009年
- 利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。
- 黄立平刘长明危艳武陆月华郭龙军
- 关键词：猪圆环病毒2型中和抗体单克隆抗体阻断ELISA
