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猪伪狂犬病病毒HeN1株全基因组测序及感染和毒力相关基因的变异特征分析被引量：12: 2015年; 2011年以来我国多个省份免疫过Bartha-K61弱毒疫苗的猪场相继发生猪伪狂犬病（PRl疫情。为分析PR病毒（PRV）流行株的变异情况，本研究对其中一株PRVHeNl分离株进行了全基因组测序，并对PRV感染相关基因（gB、gC、gD和gH）和毒力相关基因（TK、PK、RR1、RR2、gE和gI）进行比较分析。结果显示，国内分离株之间的序列同源性很高（96．2％～100％），而与国外分离株的同源性较低（92．9％～99．7％）；国内分离株与国外分离株在感染和毒力相关基因编码上存在氨基酸突变和插入／缺失特征；并且序列分析表明部分插入／缺失与微卫星序列重复单元数量的变化相关。遗传进化分析表明，国内外分离株间具有显著的遗传差异，处于两个独立的遗传分支。此外，国内分离株相对于国外分离株在gC蛋白中存在7个连续氨基酸的插入（63AAASTPA69），该插入突变可以作为PRV国内外病毒株的分子特征。本研究为有效防制PR提供实验依据。; 叶超赵款郭金潮姜成刚常晓博王淑杰王同云彭金美蔡雪辉田志军安同庆; 关键词：猪伪狂犬病病毒全基因组测序

河南某规模化猪场内猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及多样性分析被引量：1: 2015年; 为研究规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）疫苗免疫猪群中PRRS病毒（PRRSV）感染及其变异情况,本研究采集了775份血清及21份病料样品进行病原检测分析,共分离获得了14株高致病性PRRSV（HP-PRRSV）分离株,分别将其命名为Henan-A1～Henan-A14.通过对其全基因组测序及比对分析结果显示,分离株与HP-PRRSV代表株JXA1、HuN4差异显著,同源性仅约为96％.此外,这14株分离株间差异较大,平均差异率达3.44％,呈现不同的变异方向.进一步研究表明,有5个分离株不能在Marc-145细胞中增殖,这是区别于其他HP-PRRSV的重要特征,表明部分分离株的细胞嗜性发生了改变.采用抗HP-PRRSV HuN4株血清对14株分离株进行中和试验,结果显示5份血清对其中9株分离株的中和活性较低,表明目前分离的大部分PRRSV分离株的中和抗原已经发生了较大的变异.本研究结果为有效预防PRRS提供了实验依据.; 刘益民陈家锃白云张洪亮张秋月王倩张武超叶超彭金美安同庆田志军王笑梅; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞嗜性

一株不能被高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗抗血清中和的HP-PRRSV的分离鉴定被引量：5: 2014年; 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组序列已提交到NCBI （序列号：KJ019330）。基因序列比对显示，该分离株与经典株相比其NSP2蛋白存在HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的典型特征，与HP-PRRSV代表株JXA1和HuN4株的同源性仅为97.3 %，其变异主要位于基因组编码的结构蛋白GP2～GP5和非结构蛋白NSP2。血清中和试验表明10份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该病毒株，表明HEL-12的抗原发生了较大变异，是一株新的HP-PRRSV变异株。本研究表明，PRRSV一直处于不断变异中，需要对其遗传变异持续监测。; 陈家锃白云常丹张秋月王倩冷超粮张武超赵鸿远叶超李琳田志军彭金美安同庆童光志; 关键词：病毒中和试验

2015年我国部分地区2.1d新基因亚型猪瘟病毒的分子流行病学分析被引量：10: 2015年; 为了解猪瘟病毒（CSFV）在我国的流行情况，本研究对2015上半年来自4个省疑似猪瘟（csF）病料样品采用RT．PCR方法进行检测，28份样品中14份为CSFV阳性，并对这些阳性样品进行CSFVE2基因遗传进化分析。结果表明，14个病毒株中11个属于2．1d新基因亚型，它们与CSFV代表株Shimen、HCLV和2．1b基因亚型病毒株的核苷酸同源性分别为82．8％～84．1％、81．1％～82．4％和92．6％～97．1％，氨基酸同源性分别为89．8％～91．2％、88．2％～89．8％和94．1％～98．9％，其余3个病毒株属于2．1b亚型。这些2．1d亚型新分离株在E2基因的4个氨基酸（R31、S34、K303和A331）上具有相同的分子特征。本研究结果与我们2014年CSFV流行病学研究结果一致，表明2．1d亚型病毒株已成为我国现阶段CSFV的主要流行株。; 冯丽苹张洪亮刘春晓冷超粮陈家锃李真彭金美王倩白云张武超安同庆蔡雪辉童光志田志军; 关键词：猪瘟病毒流行病学

经典和高致病性PRRSV疫苗株嵌合病毒的构建及其免疫原性分析被引量：2: 2015年; 为研究经典和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗株间的生物学差异,本实验以经典PRRSV疫苗株CH-1R的全长感染性克隆p CH-1R为骨架,利用反向遗传操作技术分别将其ORF1a、ORF1b和ORF2-7替换为HP-PRRSV Hu N4-F112的相应片段,构建3个全长c DNA嵌合质粒。将构建的3个重组c DNA质粒经体外转录后转染BHK-21细胞,并于Marc-145细胞中传代,拯救出3种嵌合病毒,分别命名为r CH-1R-T1a、r CH-1R-T1b和r CH-1R-T27。病毒一步生长曲线结果表明,3种嵌合病毒在Marc-145细胞中的生长特性与亲本病毒CH-1R基本一致;动物实验结果显示,嵌合病毒实验组血清中PRRSV N蛋白抗体阳转率分别为3/3(r CH-1RT1a)、2/3(r CH-1R-T1b)和1/3(r CH-1R-T27),而CH-1R免疫组血清N蛋白抗体检测始终为阴性。以上结果表明,HP-PRRSV Hu N4-F112非结构蛋白在N蛋白抗体产生中起关键辅助或协同作用。; 张武超冷超粮张洪亮陈家锃白云张秋月彭金美刘永刚童光志田志军蔡雪辉; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征嵌合病毒

一株NSP2蛋白连续缺失48个氨基酸的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株的分离及其主要生物学特征的研究被引量：1: 2015年; 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)遗传变异特点,本研究在PRRSV流行病学调查中分离到一株PRRSV,该分离株在高致病性PRRSV(HP-PRRSV)NSP2区1 aa+29 aa缺失的基础上,突变为49 aa+29 aa的缺失株,将其命名为Henan-A14(NCBI序列号:KJ819936)。此外,该分离株在MARC-145细胞中的复制能力减弱,即其细胞嗜性有所改变。血清中和试验结果显示5份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该分离株,推测其抗原发生了较大变异。为鉴定该缺失是否影响病毒的复制,本研究以HP-PRRSV p Hu N4-F112株的感染性克隆为骨架,拯救出一株在NSP2区相应位置连续缺失48 aa的重组病毒,而该重组病毒在MARC-145细胞中的复制及血清中和试验结果表明,NSP2基因区48 aa缺失既不影响PRRSV的复制效率,也不影响病毒对HP-PRRSV制备的阳性血清中和效率。本研究的结果证明Henan-A14分离株在MARC-145细胞中复制能力的降低,以及病毒抗原中和表位与NSP2中相关的氨基酸缺失无直接关系。该分离株的鉴定为进一步研究HP-PRRSV的变异具有重要的参考价值。; 白云刘益民陈家锃张洪亮张秋月王倩张武超叶超彭金美安同庆童光志田志军; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒中和试验病毒复制

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黑龙江省杰出青年科学基金(JC201314)

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