山东省医药卫生科技发展计划项目(2011HW049)
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李瑾魏庆宽徐超肖婷王卫艳更多>>
- 相关机构：山东省医学科学院济南大学济宁市第一人民医院更多>>
- 发文基金：山东省医药卫生科技发展计划项目山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用重组抗原诊断弓形虫病的研究进展被引量：2
- 2014年
- 随着分子生物学的发展，对弓形虫重组抗原的研究取得了一系列的进展，多种弓形虫抗原基因通过基因工程手段得以表达并应用于弓形虫防治研究，这些抗原包括膜表面抗原（surface antigen，SAGs）、致密颗粒蛋白（dense granule proteins，GRAs）、棒状颗粒蛋白（rhoptry proteins，ROPs）、微线体蛋白（microneme proteins，MICs）以及基质抗原等。
- 王卫艳黄炳成
- 关键词：弓形虫病抗原诊断重组抗原致密颗粒蛋白分子生物学
- 弓形虫表面抗原SAG2基因的克隆表达纯化及鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的构建弓形虫表面抗原2(SAG2)基因重组质粒并在大肠埃希菌中表达。方法根据SAG2基因序列设计并合成引物,用PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因片段,再克隆到p GEX-4T载体中,构建重组质粒。重组质粒经酶切鉴定并测序后,在大肠埃希菌BL21中诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blotting分析其反应原性。结果 SAG2基因PCR产物大小约为561 bp,与预期相符。重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合。重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的SAG2融合蛋白分子量约为47 ku,该蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫SAG2基因,表达蛋白具有反应原性。
- 王卫艳李瑾魏庆宽贾凤菊肖婷徐超尹昆黄炳成
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化
- 刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA7基因的重组、表达及鉴定被引量：7
- 2014年
- 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据GRA7基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性。结果 GRA7基因PCR产物大小约为714bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA7融合蛋白分子质量单位约为53ku,该蛋白可被His标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA7基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
- 张成芳李瑾张海国魏庆宽王卫艳肖婷徐超贾凤菊黄炳成
- 关键词：弓形虫融合蛋白蛋白纯化
- 弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性。结果以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
- 李瑾魏庆宽贾凤菊徐超肖婷王卫艳尹昆刘功振黄炳成
- 关键词：弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化
- pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建与鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的构建pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因重组表达载体,并对其进行初步鉴定。方法根据重组体pcDNA3-p30-ROP2酶切位点和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因序列等因素设计合成引物,扩增HBsAg目的基因片段,再应用酶切、连接等分子生物学技术将HBsAg目的基因克隆至pcDNA3-p30-ROP2表达载体中。应用聚合酶链反应(PCR)初筛,再采用酶切、测序等技术对构建的重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2进行鉴定。结果 PCR扩增出HBsAg基因片段,构建了pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因真核表达载体。PCR与酶切结果显示,该基因片段大小均与理论值相符;测序结果显示该重组表达载体包含了p30-ROP2和HBsAg目的基因的完整序列。结论成功构建了多基因重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2,为进一步研究多基因核酸疫苗奠定了基础。
- 魏庆宽王英婷闫运琴肖婷李瑾徐超刘功振刘娟美仲维霞尹昆付斌闫歌黄炳成
- 关键词：乙肝表面抗原
- 弓形虫病免疫学诊断的研究进展被引量：12
- 2017年
- 弓形虫是一种能引起人兽共患疾病的机会性致病原虫。健康人群机体免疫力正常，则感染弓形虫后常为无症状带虫状态，然而当患有艾滋病、结核、肿瘤、器官移植后等免疫功能受损或抑制时，弓形虫就机会性感染引起明显的临床症状。若孕妇患有弓形虫感染可引起胎儿畸形及流产，严重者可出现死胎，早诊断早发现早治疗对优生优育、
- 张成芳张海国李瑾
- 关键词：免疫学诊断弓形虫病机会性感染人兽共患疾病免疫功能受损弓形虫感染
