广东省医学科学技术研究基金(B2010211) 作品数:6 被引量:6 H指数:2 相关作者: 辛岗 谢泽锋 李康生 许燕璇 蒋治武 更多>> 相关机构: 汕头大学 汕头大学医学院第一附属医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省医学科学技术研究基金 汕头市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
脂多糖预刺激对大脑皮质星形胶质细胞和小胶质细胞NO分泌水平的影响 被引量:2 2011年 目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预刺激对大脑皮质星形胶质细胞和小胶质细胞NO分泌水平的影响。方法:体外分离、纯化、培养星形胶质细胞和小胶质细胞。培养细胞分设LPS预刺激组(先用10ng/ml LPS预刺激18h后,改用1μg/ml的LPS再刺激),LPS 10ng/ml单次刺激组,LPS 1μg/ml单刺激组与对照组(不用LPS刺激)。分别于LPS刺激后6、24、48h收集细胞培养上清,用硝酸还原酶法检测NO水平。结果:星形胶质细胞和小胶质细胞,LPS预刺激组在24h后,NO水平增加,明显高于相应时间点LPS 1μg/ml单次刺激组(P均<0.05);其中,星形胶质细胞分泌NO的时间较长,可持续到48h,与相应单次刺激组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS体外预刺激神经胶质细胞,可促使细胞分泌NO的水平升高。 苏芸 谢泽锋 辛岗 许燕璇 李康生关键词:星形胶质细胞 小胶质细胞 脂多糖 预刺激 一氧化氮 LPS预激神经胶质细胞培养上清对神经元的影响 2012年 目的探讨神经胶质细胞经过脂多糖(Lipopolyssacride,LPS)预激后,其培养上清对神经元功能的影响。方法体外培养神经元与神经胶质细胞,免疫荧光法进行纯度鉴定。神经胶质细胞分为4组:未刺激对照组、0.01μg/ml LPS单次刺激组、1μg/ml LPS单次刺激组、预刺激组(先采用0.01μg/ml LPS刺激18h后,再用1μg/mlLPS刺激24h)。经过相应处理后收获各组条件培养上清,分别加入到神经元中,与神经元共同孵育24h后收集细胞与培养上清。采用CCK-8试剂盒与ELISA法检测神经元的存活率和分泌TNF-α、IL-6水平。结果星形胶质细胞预刺激组条件培养上清作用于神经元后,细胞存活率下降,与0.01μg/ml、1μg/ml LPS单次刺激组比差异均具有统计学意义(P<0.05);小胶质细胞各组条件培养上清作用于神经元后,细胞存活率变化不明显(P均>0.05);在星形胶质细胞各刺激组上清作用下,神经元产生TNF-α的水平,各LPS处理组培养上清刺激下水平升高,其中1μg/ml LPS单次刺激组升高明显,与对照组和0.01μg/ml LPS单次刺激组比差异具有统计学意义(P均<0.05);产生IL-6的水平亦升高,与对照组比亦均具有统计学差异(P<0.05或P<0.01);并且,预刺激组较1μg/mlLPS单次刺激组上清作用后,产生IL-6水平较低(P<0.05)。各组小胶质细胞条件培养上清作用于神经元后,产生TNF-α的水平,预刺激组水平升高明显,与对照组比差异具有统计学意义(P<0.01);对于IL-6水平,变化趋势同TNF-α,但各组间差异无统计学意义(P>0.0.5)。结论 LPS预激参与重新调配了神经胶质细胞分泌活性介质的作用,培养上清中这些分子相互制约或是协同,对神经元产生有可能是保护或是损伤效应。 谢泽锋 苏芸 蒋治武 许燕璇 辛岗 李康生关键词:神经元 脂多糖 神经胶质细胞 脂多糖刺激星形胶质细胞SOCS-3及促炎性细胞因子的表达 2011年 目的以脂多糖(lipopolysaccride,LPS)刺激,模拟革兰阴性菌感染,观察体外培养大脑皮质星形胶质细胞分泌某些促炎性细胞因子及负性调控分子的变化,为进一步了解脑部炎症中星形胶质细胞的调节机制提供更丰富的实验依据。方法采用改良McCarthy法体外对大脑皮质星形胶质细胞进行培养,抗GFAP抗体荧光鉴定纯度后,用10ng/ml LPS刺激24h后收集细胞和培养上清,Western blotting检测SOCS-3(Suppressor of Cytokine Signaling-3,SOCS-3)蛋白水平,ELISA法检测培养上清中TNF-α和IL-6水平。结果 LPS刺激24h后,星形胶质细胞中SOCS-3有升高趋势,但与正常对照比较差异无统计学意义(P>0.05);星形胶质细胞培养上清中IL-6和TNF-α的水平明显升高,与正常对照比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论 LPS刺激能有效促进星形胶质细胞分泌促炎性细胞因子;SOCS-3的表达与星形胶质细胞分泌细胞因子的变化密切相关,是调控星形胶质细胞适度产生促炎性细胞因子的重要负反馈因子。 苏芸 谢泽锋 许燕璇 辛岗 李康生关键词:星形胶质细胞 脂多糖 细胞因子信号转导抑制因子 促炎性细胞因子 体外LPS预处理小胶质细胞炎性细胞因子分泌反应的探讨 被引量:2 2015年 目的通过革兰阴性菌LPS(脂多糖,Lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞,模拟轻型细菌感染,尝试建立体外LPS耐受模型,探讨小胶质细胞促炎细胞因子分泌反应的变化情况。方法体外培养与分离小鼠大脑皮质小胶质细胞,免疫荧光法进行纯度鉴定。纯化的小胶质细胞分为未刺激对照组、0.01μg/m L LPS单次刺激组、1μg/m L LPS刺激组、预处理组(先采用0.01μg/m L LPS刺激18h后,再用1μg/m L LPS刺激6、24、48h)。处理后收获各组细胞培养上清,采用ELISA法检测小胶质细胞TNF-α、IL-6分泌水平与变化趋势。结果经过LPS处理的小胶质细胞(0.01μg/m L LPS单次刺激组、1μg/m L LPS单次刺激组与预处理组)TNF-α与IL-6分泌增加,但预处理组在经过1μg/m L LPS再次刺激不同时间点(6h、24 h、48 h)分泌的总体水平变化不大(P>0.05)。在6 h,1μg/m L单次刺激组、预处理组的TNF-α与IL-6水平比对照组水平明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);在48 h,TNF-α水平在1μg/m L单次刺激组、预刺激组中也较对照组水平明显升高(P<0.01)。另外,在LPS预处理24h与48h后,TNF-α水平较1μg/m L单次刺激组均有下降趋势,其中在48h,预刺激组较1μg/m L单次刺激组分泌减少,差异具有统计学意义(P<0.05),但IL-6水平预刺激组较1μg/m L单次刺激组分泌具有增加趋势。结论体外LPS预处理可在小胶质细胞中诱导部分耐受效应,表现为某些关键炎性细胞因子的分泌抑制,但并非是一种全面的抑制,这可能与细胞来源以及信号通路分子的重新调配有关。 谢泽锋 辛岗 李康生 苏芸关键词:小胶质细胞 脂多糖 炎性细胞因子 预处理 LPS诱导大脑皮质胶质细胞自噬基因Beclin-1蛋白表达的研究 被引量:1 2011年 目的:探讨脂多糖(lipppolys accride,LPS)刺激对大脑皮质胶质细胞自噬相关基因Beclin-1蛋白表达的影响。方法:体外分离新生小鼠大脑皮质混合胶质细胞,采用1 μg/ml LPS刺激24h后收集细胞与培养上清。Western blotting检测Beclin-1蛋白表达水平;CCK-8试剂盒检测细胞增殖率。结果:LPS刺激后,大脑皮质混合胶质细胞Beclin-1蛋白表达水平增高,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);细胞增殖率下降,与对照组比较差异亦具有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS能激活神经胶质细胞自噬相关基因Beclin-1,这种变化参与调节了胶质细胞的存活情况。 苏芸 谢泽锋 辛岗 许燕璇 李康生关键词:自噬 脂多糖 神经胶质细胞 脂多糖刺激对小鼠大脑皮质混合胶质细胞产生HMGB-1的影响 被引量:1 2011年 目的用革兰阴性菌细胞壁成分脂多糖(lipopolysaccride,LPS)刺激大脑皮质混合胶质细胞,检测高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)的表达情况与转位作用,了解HMGB-1与其他炎性介质相互作用参与神经胶质细胞介导脑部炎症反应的机理。方法体外培养小鼠大脑皮质混合胶质细胞,采用1μg/ml LPS刺激,收集细胞以及培养上清,Westernblotting检测混合胶质细胞HMGB-1的蛋白水平;免疫荧光法检测HMGB-1的转位情况;Griess法检测培养上清中NO的水平。结果 LPS刺激下,大脑皮质混合胶质细胞HMGB-1的蛋白表达水平增加并向胞浆中移位,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);NO与HMGB-1变化趋势一致,水平增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LPS刺激模拟革兰阴性菌感染,大脑皮质混合胶质细胞产生的HMGB-1与NO协同参与了其介导的脑部炎症反应。 苏芸 谢泽锋 辛岗 许燕璇 李康生关键词:HMGB-1 胶质细胞 炎症 一氧化氮