国家自然科学基金(30800791)
- 作品数：7 被引量：132H指数：6
- 相关作者：黎观红瞿明仁洪智敏贾永杰刘思国更多>>
- 相关机构：江西农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究被引量：12
- 2011年
- 取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50 min或嗜热菌蛋白酶单独消化110 min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的上皮细胞。分离的细胞接种培养12～24 h贴壁,48～72 h细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集落,6～7 d细胞汇合成片,成"铺路石样",细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠。经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞。
- 洪智敏贾永杰瞿明仁黎观红刘思国
- 关键词：原代培养鸡胚
- 抗菌肽的抗菌作用及其机制被引量：89
- 2011年
- 基因编码的抗菌肽广泛分布于昆虫、植物、动物及人体内,是先天性免疫防御系统的重要组成部分。抗菌肽不仅具有广谱抗细菌能力,还可以抗真菌、被膜病毒等多种微生物以及寄生虫。抗菌肽除了具有较强的直接杀灭有害微生物的活性外,还具有许多其他生物学功能,如抑制肿瘤细胞、中和内毒素以及抗炎等。它们还可以通过趋化树突状细胞、单核细胞和记忆T细胞,在先天性免疫(非特异性免疫)和获得性免疫(特异性免疫)反应之间起桥梁作用,并启动获得性免疫系统,提高机体抵抗微生物感染的获得性免疫水平。本文综述了抗菌肽的生物学作用、抗菌作用机制及其开发应用前景。
- 黎观红洪智敏贾永杰瞿明仁
- 关键词：抗菌肽先天性免疫
- 抗菌肽的生物学作用及其抗菌机制研究进展
- 基因编码的抗菌肽广泛分布于昆虫、植物、动物及人体内,是天然免疫防御系统的重要组成部分。抗菌肽不仅有广谱抗细菌能力,还可以抗真菌、被膜病毒等多种微生物及抗寄生虫。抗菌肽除了具有较强的直接杀灭有害微生物的活性外,它们还具有许...
- 黎观红洪智敏贾永杰瞿明仁
- 关键词：抗菌肽天然免疫
- 文献传递
- 乳铁素——来源于乳铁蛋白的多功能抗菌肽被引量：7
- 2009年
- 乳铁素是乳铁蛋白在酸性环境条件下经胃蛋白酶水解从N-端释放的多功能活性多肽.乳铁素不仅保持了完整乳铁蛋白的大部分生物学活性,而且乳铁素的某些生物学活性比乳铁蛋白更强.乳铁素具有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和抗炎症等多种生物学功能.然而,乳铁素的生物学作用大部分是通过体外试验发现和验证的,乳铁素的体内生物学效应还需更多的试验加以评价和证实,现代基因组学和蛋白组学分析方法和技术将有助于深入了解乳铁素体内生物学作用机制.本文就乳铁素的结构、生物学功能及其作用机制、制备和应用前景作一综述.
- 黎观红张锦华瞿明仁游金明
- 关键词：乳铁素乳铁蛋白抗菌肽
- 发酵乳酸杆菌F6对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响被引量：6
- 2012年
- 采用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)检测益生性发酵乳酸杆菌F6刺激鸡小肠上皮细胞后抗菌肽β-防御素-9(AvBD9)基因表达变化,为从益生菌与上皮细胞抗菌肽表达关系的新角度解析益生菌发挥益生作用的新途径和机制提供一定的基础及依据。利用不同剂量(2×105,2×106,2×107 CFU)的发酵乳酸杆菌F6分别刺激原代培养的鸡小肠上皮细胞4h,提取刺激后的细胞总RNA,反转录为cDNA,FQ-PCR检测抗菌肽AvBD9基因表达变化。结果表明,未受刺激的正常对照组也检测到AvBD9mRNA的表达,发酵乳酸杆菌F6能上调AvBD9基因表达。刺激组中AvBD9mRNA的表达在不同剂量组之间存在差异。2×105 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量极显著高于未受细菌刺激的对照组和2×106 CFU/mL组(P<0.01),显著高于2×107 CFU/mL组(P<0.05)。2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组AvBD9mRNA的表达量显著高于未受细菌刺激的对照组(P<0.05),但2×106 CFU/mL组和2×107 CFU/mL组之间无显著差异(P>0.05)。发酵乳杆菌F6与鸡小肠上皮细胞相互作用过程中可提高抗菌肽AvBD9mRNA的表达,且存在剂量依赖性。
- 洪智敏张和平贾永杰刘思国黎观红
- 关键词：荧光定量PCR
- 鸡β-防御素-9的融合表达及其多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2013年
- 为制备鸡β-防御素-9(AvBD9)多克隆抗体,本试验将AvBD9基因插入pGEX-6 P-1载体,构建重组基因pGEX6 P-AvBD9大肠杆菌表达质粒。将通过切胶纯化获得的表达产物包涵体谷胱甘肽转移酶-AvBD9(GST-AvBD9)融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗AvBD9血清,并检测抗体效价。结果表明,经间接酶联免疫分析(ELISA)及蛋白质免疫印迹(Western blot)方法证实,获得的融合蛋白免疫新西兰大白兔得到了特异性的多克隆抗体,抗体效价为1∶38 400。
- 许兰娇洪智敏司微刘宝生张锦华刘思国黎观红
- 关键词：抗菌肽融合蛋白多克隆抗体
- 鼠李糖乳酸杆菌LG_A对鸡小肠上皮细胞β-防御素-9基因表达的影响被引量：14
- 2012年
- 本研究旨在研究益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞β-防御素-9(AvBD9)表达的调节作用。选用鼠李糖乳酸杆菌LGA对体外培养的鸡小肠上皮细胞进行剂量依赖性及时间依赖性刺激实验,利用实时荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)从mRNA水平研究刺激后上皮细胞AvBD9基因表达水平的差异。结果表明,不同浓度(2×105、2×106、2×107 cfu.mL-1)鼠李糖乳酸杆菌LGA均能上调AvBD9mRNA的表达,且在不同细菌浓度之间AvBD9mRNA的表达存在差异。热灭活鼠李糖乳杆菌LGA亦能上调AvBD9基因表达,且上调值显著高于活菌(P<0.05)。鼠李糖乳杆菌LGA刺激上皮细胞后AvBD9表达存在时间依赖关系,12h时AvBD9的表达达到峰值。Western blot检测结果显示,鼠李糖乳杆菌LGA刺激后的上皮细胞培养上清中存在AvBD9蛋白表达,表明AvBD9蛋白可以分泌到细胞外而发挥其生物学功能。益生性鼠李糖乳酸杆菌LGA与鸡肠道上皮细胞的相互作用过程中,鼠李糖乳酸杆菌LGA能够促进上皮细胞抗菌肽β-防御素-9的表达。本研究结果提示益生性乳杆菌可能通过促进肠道上皮抗菌肽的表达而发挥其益生作用。
- 黎观红洪智敏贾永杰易中华瞿明仁刘思国
- 关键词：荧光定量PCR
- 乳酪蛋白源抗菌肽——结构、功能及应用被引量：7
- 2010年
- 基因编码的抗菌肽广泛分布于昆虫、植物、动物及人体内,是天然免疫防御系统的重要组成部分。然而,抗菌肽亦能通过食物蛋白水解产生,这些食物蛋白源抗菌肽可视为"营养免疫"的重要组成部分。酪蛋白是乳中最主要的蛋白质,除了提供氨基酸和能量的营养功能外,酪蛋白氨基酸序列中还存在大量的抗菌肽片段,当用适当的蛋白酶进行体外水解或在胃肠道消化过程中以及食品加工过程中,它们的活性就被释放出来。体外实验表明,这些抗菌肽片段具有广谱抗菌活性。然而,用动物模型或人类临床试验研究这些抗菌肽体内活性的报道却很少,且这些抗菌肽的抗菌机制目前还不清楚,乳酪蛋白源抗菌肽的体内生物学效应还需更多的试验加以评价和证实。本文对乳酪蛋白来源的抗菌肽的序列结构、获取方法、抗菌作用及其应用前景做一阐述。
- 黎观红张锦华瞿明仁易中华
- 关键词：酪蛋白抗菌肽氨基酸序列
