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低氧反应元件对缺血心肌转染人血管内皮生长因子165基因表达的调控作用被引量：2: 2008年; 目的观察低氧反应元件（HRE）对低氧、复氧心肌细胞及缺血心肌转染人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞，采用不同氧条件进行培养；建立猪心肌缺血-复灌动物模型，将在HEK293T细胞包装后获得的rAVV-9HRE-hVEGF165病毒分别转染心肌细胞及动物缺血心肌。取培养心肌细胞及培养液，另取缺血区心肌组织，采用细胞免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot方法分别测定hVEGF砌蛋白表达；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定hVEGF165 mRNA表达；Ⅷ因子染色，计数缺血心肌新生血管变化。结果病毒转染率为87％；心肌细胞A、B及E组培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高（P〈0．01），细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性；RT-PCR检测显示，心肌细胞A、B及E组可见484bp目的条带；在动物整体水平，与转基因缺血组比较，转基因复灌组hVEGF165 mRNA及蛋白表达显著减弱（P〈0．01），心肌毛细血管密度亦减少。结论HRE作为氧敏感基因调控开关能有效地调控缺血心肌转染hVEGF165基因的表达。; 董红燕姜波张中明王伟张宜乾徐夏红; 关键词：低氧反应元件血管内皮生长因子心肌基因表达

VEGF和Ang-1联合转染对兔心肌梗死再生血管分支和管径的影响: 2012年; 目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-1（Ang-1）基因联合转染对兔心肌梗死部位再生血管分支数量和毛细血管管径大小的影响.方法将75只日本大耳白兔随机分为5组（每组n=15）,采用冠状动脉左前降支结扎法建立兔心肌梗死模型.单纯梗死组,仅行冠状动脉左前降支结扎术;VEGF组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因; Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因;VEGF＋Ang-1组,向心肌梗死边缘部位注射2型重组腺相关病毒携带的VEGF165基因和2型重组腺相关病毒携带的Ang-1基因混合液（混合比例为1：1）;载体组,向心肌梗死边缘部位注射不携带VEGF165和Ang-1基因的2型重组腺相关病毒载体溶液.8周后取材,植物凝集素B4（Lectin B4）灌注染色检测心肌梗死边缘再生血管分支数量,CD31免疫组化检测毛细血管直径.结果与单纯梗死组、Ang-1组和载体组相比,VEGF组和VEGF＋Ang-1组再生血管分支增多（P〈0.01）;与其他各组相比,Ang-1组再生血管分支显著减少（P〈0.01）.与单纯梗死组、VEGF组和载体组相比,Ang-1组和VEGF＋Ang-1组梗死边缘区毛细血管直径显著增加（P〈0.01）;与其他各组相比,VEGF组梗死边缘区毛细血管直径减小（P〈0.01）.结论 VEGF和Ang-1联合转染可以促进心肌梗死边缘部位再生血管分支增多和毛细血管管径增大.; 石合现王正袁延亮张昊董红燕张中明; 关键词：心肌梗死血管生成素-1

Hypoxic response elements and Tet-On advanced double-controlled systems regulate hVEGF_(165) and angiopoietin-1 gene expression in vitro被引量：1: 2011年; Angiogenesis in ischemic tissue is a complex and multi-gene event. In the study, we constructed hypoxic re-sponse elements （HRE） and the Tet-On advanced double-controlled systems and investigated their effects on the expression of hVEGF165 and angiopoietin-1 （Ang-1） genes in rat cardiomyocytes exposed to hypoxia and pharma-cologic induction. We infected neonatal rat cardiomyocytes with recombinant rAAV-rtTA-Rs-M2/rAAV-TRE-Tight-Ang-1 and rAAV-9HRE- hVEGF165. Our results indicated that the viral titer was 1×1012 vg /mL and the viral purity exceeded 98%. hVEGF165 expression was induced by hypoxia, but not by normoxia （P 0.001）. Ang-1 expression was evident under doxycycline induction, but undetectable without doxycycline induction （P 0.001）. Immunofluorescence staining showed that positively stained hVEGF165 and Ang-1 protein appeared only under both hypoxia and doxycycline induction. We demonstrate here that HRE and the recombinant Tet-On advanced double gene-controlled systems sensitively regulate the expression of hVEGF165 and Ang-1 genes in an altered oxygen environment and under pharmacological induction in vitro.; Hao ZhangHongyan DongBo JiangZheng WangRui ChenZhifeng ZhangZhongming Zhang; 关键词：ANGIOPOIETIN-1 DOXYCYCLINE CARDIOMYOCYTE

低氧诱导因子在兔慢性缺血心肌中的表达趋势被引量：1: 2010年; 目的探讨低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）在兔缺血心肌的表达趋势。方法建立兔缺血心肌动物模型,于冠状动脉结扎前及术后第2、4、6、8、10、12周取各组动物缺血区心肌组织,采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应（Q-RT-PCR）法测定心梗区HIF-1αmRNΑ的表达;应用免疫组化及West-ern Blot法测定HIF-1α蛋白表达。结果与非缺血组相比,兔心肌缺血早期HIF-1α表达水平显著增高（P〈0.01）,HIF-1αmRNA及蛋白分别于第2及第4周达到高峰,持续约24周后,于第8周再次升高,并随之开始持续缓慢降低,但在缺血后第12周仍高于正常心肌表达量。结论HIF-1α的表达与心肌梗死区氧供关系密切,在心肌缺血早期,高表达HIF-1α参与了维持氧稳态及对低氧代谢的适应,在慢性缺氧期,随着HIF-1α调控多种下游靶基因表达,增加组织氧供使其表达渐显著降低。; 徐夏红王强董红燕姜波张中明; 关键词：低氧诱导因子心肌缺血基因表达

低氧反应元件调控缺血心肌转染hVEGF_(165)基因表达对新生血管的影响被引量：1: 2009年; 目的探讨动物整体水平下低氧反应元件（HRE）调控缺血心肌转染hVEGF165基因表达对促生血管的影响。方法建立兔心肌缺血动物模型,实验分为转基因组、缺血对照组、载体对照组和假手术组。取缺血区心肌组织,检测心肌组织HIF-1α和hVEGF165表达,应用CD31及α-SMA免疫组化染色测定缺血心肌新生血管密度变化。结果心肌缺血早期,伴随内源性HIF-1α表达增加,hVEGF165mRNA及蛋白表达相继升高,缺血4～6周至高峰（P〈0.01）,缺血12周,hVEGF165表达下调至缺血前水平。缺血12周,转基因组CD31（＋）血管密度显著高于缺血对照组（P〈0.01）;但是,与缺血前相比,缺血12周,转基因组α-SMA（＋）血管密度显著低于缺血前水平（P〈0.01）。结论HIF-1α-HRE对缺血心肌转染hVEGF165表达发挥了有效的正相调控作用,有效地促进缺血心肌毛细血管生成。但hVEGF165作为促血管生成早期调节因子,其促生血管的结构尚不完整。; 董红燕王强张中明袁延亮张宜乾徐夏红; 关键词：低氧反应元件基因调控心肌细胞

全胸腔镜与传统开胸肺癌根治术淋巴结清扫的对比研究被引量：5: 2014年; 目的探讨全胸腔镜下肺癌根治术与传统开胸手术治疗临床Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌淋巴结清扫的效果。方法接受手术治疗的临床Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌患者199例，采用全胸腔镜手术患者105例（胸腔镜组），传统开胸手术患者94例（开胸组），比较2组患者的淋巴结清扫数，并分别比较2组患者各区域淋巴结的清扫数。结果2组淋巴结清扫数平均值及阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。根据术后病理分期比较淋巴结清扫数差异无统计学意义（P〉0．05）。左、右肺癌各区域淋巴结清扫数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于临床Ⅰ、Ⅱ期非小细胞肺癌，全胸腔镜手术淋巴结清扫可以达到传统开胸手术的效果。; 胡波袁延亮王正王伟王国祥周中新; 关键词：肺癌全胸腔镜传统开胸手术淋巴结清扫

Tet-on Advanced调控人血管生素-1基因真核表达载体的构建、表达与鉴定被引量：1: 2008年; 目的构建pTRE-Tight-Ang-1可调控性真核表达载体,并检测其在心脏细胞中表达的可调控性。方法巢式多聚酶链反应(nested PCR)从肺组织扩增Ang-l,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight载体中,采用脂质体将pTet-on-Advanced质粒和pTRE-Tight-Ang-1共转染入新生SD大鼠心肌细胞,以不同浓度强力霉素(Dox)诱导,Western blot检测Ang-1蛋白表达水平。结果通过巢式PCR获得了Ang-1全长cDNA,与Genebank比对,序列完全一致。Western blot检测表明,所构建的pTRE-Tight-Ang-1可调控性表达载体能在心肌细胞内表达,表达量呈浓度依赖性。结论该实验成功构建pTRE-Tight-Ang-1真核表达载体,在心肌细胞中的表达受Dox的调控。; 张昊董红燕张中明; 关键词：ANG-1 真核表达

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国家自然科学基金(30672081)

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