广西壮族自治区科技攻关计划(0537008-3B)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 相关作者：庞耀珊谢芝勋谢志勤谢丽基黄琦更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 胸膜肺炎放线杆菌apxⅠA基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析被引量：1
- 2008年
- 用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apxⅠA基因片段,分别构建了大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxⅠA和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apxⅠA。对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%。利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apxⅠA和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apxⅠA分别进行表达。结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白。证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达。
- 黄琦谢芝勋庞耀珊
- 关键词：A基因密码子偏好性
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxIA基因在毕赤酵母中的表达与分析被引量：3
- 2008年
- 构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIA基因的真核表达载体pPICZαA/apxI,并在毕赤酵母GS115中进行表达。SDS-PAGE显示仅在浓缩40倍的上清中检测得到表达产物,同时经RT-PCR可检测到重组酵母中编码目的基因成熟肽的mRNA,经分析发现目的序列AT含量高达62%,其中含49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%。证实ApxIA在毕赤酵母中为低水平表达。
- 黄琦谢芝勋庞耀珊童桂香文艳玲谢志勤邓显文刘加波谢丽基
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌毕赤酵母
- 母猪子宫内膜炎病原菌的分离鉴定及药敏试验被引量：9
- 2008年
- 试验对广西11个猪场98份患子宫内膜炎的母猪子宫分泌物进行了细菌分离鉴定,分离到的细菌有链球菌、大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌,其中链球菌、大肠杆菌分别占53.85%和37.50%。对分离的主要细菌链球菌和大肠杆菌进行了药敏试验。
- 郑列丰陈泽祥禤雄标胡帅杨威
- 关键词：母猪子宫内膜炎病原菌药敏
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxIA基因在大肠杆菌中的融合表达与纯化被引量：3
- 2008年
- 选取猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apxIA基因序列中的抗原决定簇集中的区域,采用PCR方法从APP血清1型参考株259的基因组DNA中,扩增apxIA基因中约954bp的片段,连接到pMD-18T载体,经测序正确后,以EcoRI和NotI双酶切,亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌DH5α,经0.4mmol/LIPTG诱导表达,产物通过尿素变性复性,并以Glutathione Sepharose 4B亲和层析的方法对目的蛋白进一步纯化。SDS-PAGE分析结果显示,目的基因在大肠杆菌DH5α中以包涵体形式高效表达,经薄层凝胶扫描分析占菌体总蛋白的32%,纯化后的GST融合蛋白纯度达到95%,为亚单位疫苗和诊断抗原的研究奠定了基础。
- 黄琦谢芝勋庞耀珊刘加波邓显文谢志勤谢丽基
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌大肠杆菌纯化
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒2型二重实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2010年
- 以胸膜肺炎放线杆菌(App)apx ⅣA基因和猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因为靶基因,分别设计特异性引物和探针,建立App和PCV-2的二重荧光PCR方法。App引物扩增的目的片段大小为132bp,PCV-2为169bp。建立的方法可在同一反应体系中同时对App和PCV-2进行定量检测鉴别,其敏感性分别为1×101拷贝和1×100拷贝,对其他猪病病原核酸的检测为阴性。利用该方法对10份人工感染临床样品进行检测试验,其结果符合率达100%,说明该方法可用于对临床样品中App和PCV-2的检测。
- 庞耀珊谢芝勋黄琦谢丽基邓显文谢志勤刘加波
- 关键词：实时荧光PCR胸膜肺炎放线杆菌猪圆环病毒2型
