国家社会公益研究专项计划(2005DIB1J086)
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
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- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家社会公益研究专项计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人脂肪间充质干细胞在聚ε-己内酯材料上转分化为内皮细胞
- 2011年
- 目的研究人脂肪来源的间充质干细胞（hADSCs）在聚ε-己内酯共聚物上的附着和增殖能力及分化为内皮细胞的能力。方法选择材料孔径为60-80μm（小孔径）和180-200μm（大孔径）,并计算在14 d内的吸水率和降解率。将hADSCs种植在不同孔径的材料上,计算接种率。利用DAPI免疫荧光标记及扫描电镜观察hADSCs的生长及分布情况,用CCK-8法绘制hADSCs增殖曲线。在材料上含有40 ng/mL VEGF和10 ng/mL bFGF的培养基上培养30 d后,用流式细胞术检测vWF和VE-cadherin,免疫荧光检测Flk-1。结果在小及大孔径材料上14 d的吸水率分别为200%和216.7%,降解率为13.3%和21.7%。hADSCs呈长梭形依附于多孔材料表面。小孔径的细胞接种率为98.3%±0.3%,明显大于大孔径的90.3%±1.5%（P〈0.05）;增殖曲线亦是如此。在小孔径上分化50 d后,vWF和VE-cadherin的阳性率分别为80.9%±0.9%和84.3%±1.1%,大多数细胞表面均表达Flk-1。结论 hADSCs较适合在孔径为60~80μm聚ε-己内酯共聚物材料上生长和增殖,并可在材料上有效分化为内皮细胞。
- 陈嘉翟羽佳仉红刚张静张秋菊修瑞娟
- 关键词：聚Ε-己内酯内皮细胞
- 内皮祖细胞调控分子及机制研究进展
- 2012年
- 内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）是内皮细胞的前体细胞。Asahara等[1]于1997年首先从外周血中分离出CD34＋/VEGFR2＋的血管EPCs,它具有向内皮细胞分化的潜能。研究结果表明,EPCs是一群主要来源于胚胎发育阶段的中胚层和出生后的骨髓、主要存在于胎肝和脐带血以及成人骨髓和外周循环血中的、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞[2]。EPCs不仅参与人胚胎血管发生,
- 卡米拉.阿不里米提仉红刚
- 关键词：内皮祖细胞调控分子EPCS细胞分化血管发生CELLS
- SELDI蛋白质芯片筛选差异蛋白分子的二级鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的探讨以SELDI蛋白质芯片筛选后的细胞差异表达蛋白的分离和鉴定方法及其意义。方法以经体外培养及10μmol/L褪黑素药物干预的内皮祖细胞差异表达蛋白质为研究对象,分别采用Tricine-SDS-PAGE和双向凝胶电泳方法进行差异蛋白分离及结果比较,以FT-MS二级质谱鉴定。结果经Tricine-SDS-PAGE分离后,选取分子量为53 ku左右的趋势性差异表达蛋白进行FT-MS分析,质谱鉴定为微管蛋白-α3(吻合度评分为87)。经双向凝胶电泳分离后,于凝胶近酸性端、分子质量在72～95 ku之间区域,选取蛋白表达量较高的一点,质谱鉴定其为人热休克蛋白90-α(吻合度评分为91)。结论 Tricine-SDS-PAGE对于大致35～62 ku范围的蛋白分离较清晰、重复性好且样品用量少,2-DE对最低上样量有较严格要求,但它能提供分子质量、等电点双重参数来更准确定位所感兴趣蛋白点,且对大分子质量蛋白的分离效果更佳,经质谱鉴定结果理想。
- 卡米拉.阿不里米提仉红刚马可王琴张秋菊修瑞娟
- 关键词：SELDI双向凝胶电泳质谱
- SELDI蛋白质芯片检测技术被引量：7
- 2008年
- 从基因组学到蛋白质组学,到当前有关小RNA对蛋白质合成调控的研究无一例外地说明蛋白质是直接发挥对生命活动调控的物质。同基因研究相比较,由于蛋白质分子种类繁多,有复杂的修饰成份和空间结构,使得蛋白质研究比较困难。新近发展起来的蛋白质芯片技术为蛋白质的检测和研究提供了新的技术平台,比如荧光标记技术,蛋白质指纹图谱-飞行时间-质谱联用技术(SELDI蛋白质芯片),表面等离子基元共振生物传感器技术(SPR芯片)以及初步应用的光学蛋白质芯片技术,其中,后三种是新兴的无需标记进行蛋白质检测的技术。就SELDI蛋白质芯片及其新近研究作一综述。
- 马可仉红刚
- 关键词：蛋白质芯片疾病检测
- 以SELDI芯片进行细胞标本蛋白分析的方法学研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨以SELDI芯片技术进行细胞标本蛋白分析的最适方法及条件,筛选细胞标本蛋白表达差异。方法:对细胞标本分别用超声裂解法,U9细胞裂解缓冲液配方和自配细胞裂解液提取蛋白,以BCA法测定蛋白浓度;分别以磁珠活化后点样和生物芯片处理器点样使蛋白样品与芯片结合;并对提取蛋白进行检测,比较不同蛋白浓度梯度点样及WCX2,SAX2,IMAC-Cu,H50芯片捕获蛋白差异,用WCX2芯片筛选蛋白差异表达。结果:相同培养条件细胞以上述三种不同蛋白提取方法获得的蛋白浓度分别为:0.25±0.034μg/μl,0.6±0.06μg/μl,1.02±0.077μg/μl;生物芯片处理器点样法操作简单,要求样本量较少,点样时间短;SELDI芯片蛋白质峰图谱与蛋白浓度呈较好的正相关;WCX2,SAX2,H50,IMAC-Cu芯片捕获的蛋白质种类有较大区别;在分子量1000～300000Da范围内,以WCX2芯片共检测到87个差异蛋白峰,其中17个呈趋势变化。结论:上述三种方法比较,选用自配的细胞裂解液提取蛋白的浓度较高且更适于芯片研究;生物芯片处理器能较好地使蛋白与芯片结合;SELDI芯片能准确定位蛋白,且其蛋白质峰与被测蛋白浓度呈正相关变化;SELDI各芯片捕获蛋白类型不同,选择适宜芯片或联合运用芯片检测更易获得较理想蛋白差异表达结果。
- 马可王琴仉红刚张秋菊修瑞娟
- 关键词：SELDI细胞蛋白
- 体内微环境因素对微血管形成的影响
- 2010年
- 陈嘉仉红刚
- 关键词：微血管形成环境因素机体内微环境血管通道营养物质
- 内皮祖细胞的体外培养被引量：4
- 2010年
- 目的建立一个体外培养脐血来源内皮祖细胞(EPC)的培养体系。方法脐带血经密度梯度离心获得单个核细胞,按本室已建立的培养体系培养细胞,免疫细胞化学和流式细胞术对培养7 d后的细胞进行CD34、CD133、vWF、CD146及CD144鉴定。结果接种后前5 d为生长的潜伏期,细胞开始贴壁,无明显扩增。第6天平均每个视野下细胞数目为287±45;第9天细胞数为282±46;第12天开始,细胞进入对数生长期,细胞数为805±67(P<0.05);第19天细胞继续增殖,细胞数为1 115±182(P<0.05);第23天时,细胞进入凋亡期,数量明显减少,为265±61(P<0.05)。vWF、CD146、CD144表达阳性。流式细胞术结果表明,梭形样细胞群体中,CD34阳性率为88.98%±5.15%(P<0.05),CD133阳性率为1.20%±1.44%(P<0.05)。结论利用本实验室的培养体系成功培养出内皮祖细胞。
- 王琴马可仉红刚张秋菊修瑞娟
- 关键词：内皮祖细胞细胞培养细胞鉴定
- 脂肪来源间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展被引量：4
- 2010年
- 脂肪来源的间充质干细胞具有较强的体外增殖能力,因具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件低等优势已引起各国学者的关注。脂肪间充质干细胞凭借其多向分化潜能,是人体干细胞库潜在的重要来源之一。目前,研究人员已成功地在体外将其诱导为内皮细胞,成骨细胞、成软骨细胞、脂肪前体细胞、平滑肌细胞,心肌细胞、神经样细胞等。就脂肪来源的间充质干细胞体外定向诱导分化血管细胞的研究进展作一综述。
- 翟羽佳仉红刚
- 关键词：内皮细胞平滑肌细胞诱导分化
