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兔抗人TGF-β_1多克隆抗体的制备被引量：1: 2011年; 目的以人重组TGF-β1蛋白作为抗原,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法重组蛋白与弗氏佐剂等体积混匀,免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果成功获得兔抗人TGF-β1多克隆抗体,纯化后抗体效价达1∶110 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体具有良好的特异性,能满足进一步实验的需要。; 郭冉刘洁婷吴丹徐秋玲初彦辉; 关键词：转化生长因子Β1 抗纤维化多克隆抗体

TGF-β1原核表达载体的构建: 2011年; 目的:克隆人TGF-β1基因,为TGF-β1的研究提供平台。方法:应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列,将TGF-β1基因插入载体PET-28a,构建pET-28a-TGF-β1重组质粒。结果:经限制性内切酶鉴定及DNA序列测定,重组质粒PET-28a-TGF-β1序列及阅读框架正确。结论:获得了TGF-β1编码序列和表达载体,能满足进一步实验的需要。; 郭冉刘洁婷刘海峰张春军初彦辉; 关键词：TGF-Β1 抗纤维化原核表达

组织贴壁法原代培养人皮肤瘢痕成纤维细胞被引量：3: 2010年; 目的:探索和建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,为皮肤瘢痕体外研究提供平台。方法:采用组织块贴壁法进行瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,CO2浓度为5%,饱和湿度下培养。结果:皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,18d～20d可传第一代,以后每7d～10d可传一代,细胞形态为长梭形。结论:培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究。; 郭冉刘洁婷刘海峰董凯初彦辉; 关键词：皮肤瘢痕成纤维细胞原代培养

重组人成纤维细胞生长因子-21对2型糖尿病模型大鼠LXRα及GLUT1 mRNA表达的调节作用被引量：1: 2009年; 目的研究重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF-21)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠LXRα及GLUT1mRNA表达的调节作用。方法将T2DM大鼠模型随机分组,每日皮下注射rhFGF-21,8周后,测定大鼠空腹FBG、FA、TG、TC、HDL-C、LDL-C含量,采用RT-PCR方法检测LXRα及GLUT1 mRNA的表达水平。结果(1)rhFGF-21能稳定降低T2DM模型大鼠血糖。(2)rhFGF-21用药组大鼠较T2DM模型组大鼠LXRα和GLUT1 mRNA表达量显著增加。(3)大、中剂量rhFGF-21能显著降低T2DM模型大鼠血清FA、TG、TC、LDL-C含量,同时显著升高血清HDL-C含量。结论rhFGF-21能上调T2DM模型大鼠LXRα、GLUT1 mRNA表达,增加基础水平的葡萄糖转运,从而降低血糖,改善脂质代谢紊乱。; 邹文萍张羽飞王会岩武艳袁晓环初彦辉; 关键词：2型糖尿病肝X受体葡萄糖转运蛋白1

重组人转化生长因子β1原核表达及多克隆抗体制备: 2012年; 目的克隆人转化生长因子β1(TGF-β1)基因,原核表达TGF-β1蛋白,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列,构建pET-28a-TGF-β1重组质粒。转化至E.coli BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Western-blot检测目的蛋白的抗原性。免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接ELISA法检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果获得了TGF-β1编码序列和表达载体,目的蛋白主要存在于超声破碎后的包涵体中;经Western-blot检测目的蛋白存在抗原性;获得纯化的兔抗人多克隆抗体效价达1∶10 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体效价较高,具有良好的特异性。; 郭冉刘洁婷吴丹刘海峰初彦辉; 关键词：转化生长因子Β1 抗纤维化原核表达多克隆抗体

转化生长因子β与增生性瘢痕的研究进展被引量：1: 2009年; 增生性瘢痕是世界上困扰人类生存生活的重大难题,目前对增生性瘢痕的研究主要集中在转化生长因子β(TGF-β)拮抗剂方面。近年来随着对TGF-β研究理论的不断深入,越来越多针对增生性瘢痕的TGF-β生物制剂引起研究人员的广泛关注,已成为治疗增生性瘢痕的研究热点,并有望成为诊断和治疗增生性瘢痕的临床药物。; 刘海峰郭冉刘洁婷陈培董凯初彦辉; 关键词：转化生长因子Β 瘢痕成纤维细胞增生性瘢痕

截短型TGF-β Ⅱ型受体原核表达载体的构建被引量：1: 2010年; 目的:构建截短型TGF-β型受体,为TGF-βⅡ型受体的研究提供平台。方法:用定向克隆方法将tTGF-β基因插入载体PET-28a,原核表达,构建重组质粒tTGF-βRⅡB。结果:经酶切鉴定及DNA序列测定,重组质粒tTGF-βRⅡB序列及阅读框架正确。结论:成功地构建了PET-28a-tTGF-βRⅡB重组质粒。; 刘洁婷郭冉刘海峰董凯初彦辉; 关键词：原核表达

一种新型的截短型转化生长因子βⅡ型受体在大肠杆菌中的表达及活性鉴定被引量：2: 2009年; 克隆人源的截短型转化生长因子βⅡ型受体(tTGF-βRⅡ),成功构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。采用PCR技术扩增得到目的基因tTGF-βRⅡ,插入原核表达载体pGEX4T3的相应位点,并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高可溶性表达的重组蛋白,重组蛋白GST-tTGF-βRⅡ经Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化后,再经凝血酶酶切,然后经Glutathione-Sepharose4B纯化获得目的蛋白tTGF-βRⅡ,SDS-PAGE分析表明:可以通过Glutathione-Sepharose4B亲和层析纯化得到GST-tTGF-βRⅡ,其分子量约37.0kDa,和目的蛋白tTGF-βRⅡ,分子量为11.0kDa。Western blot结果显示GST-tTGF-βRⅡ和tTGF-βRⅡ为特异性蛋白。运用基因工程的方法获得tTGF-βRⅡ目的蛋白,对瘢痕成纤维细胞增殖具有很好的抑制作用。; 初彦辉刘海峰王小花张羽飞武艳袁晓环

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黑龙江省自然科学基金(D2007-99)