北京市教育委员会科技发展计划(KM200410025008)
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 相关作者：王艳张力平平国玲李卫红曹宁更多>>
- 相关机构：首都医科大学北京积水潭医院中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：北京市教育委员会科技发展计划北京市属高等学校人才强教计划资助项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制作用及其分子机制被引量：4
- 2007年
- 目的:从分子水平观察链球菌蛋白质对人肝癌Bel-7402细胞的生长增殖的抑制作用。方法:实验于2005-10/2006-11在首都医科大学病原生物学系实验室完成。①链球菌32080株购自中国医学细菌保藏管理中心,人肝癌Bel-7402细胞株由首都医科大学细胞生物学系惠赠。②常规培养链球菌并按照Winters方法提取细菌蛋白。③用0,10,20,100mg/L细菌蛋白作用于单层培养的Bel-7402细胞24,48,72h,采用MTT法检测链球菌蛋白对细胞的增殖抑制作用。④Bel-7402细胞经10mg/L或50mg/L细菌蛋白分别作用48,72h后,流式细胞术检测细菌蛋白对癌细胞生长周期时相分布。⑤Bel-7402细胞经50mg/L的细菌蛋白分别作用24,48,72h后,Annexin-v PI双染法检测Bel-7402细胞凋亡率。⑥用50mg/L的链球菌蛋白分别作用于Bel-7402细胞0,24,48,72h后,Western Blot检测链球菌蛋白对Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的影响。结果:①链球菌蛋白对Bel-7402细胞的抑制作用:链球菌蛋白能显著抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,100mg/L细菌蛋白作用于细胞24,48,72h的抑制率分别为15.6%,35.6%,50%,呈剂量和时间依赖关系。②细菌蛋白对肝癌细胞生长周期时相分布及细胞凋亡率的影响:经链球菌蛋白(10,50mg/L)作用后,G2/M期Bel-7402细胞比率较正常对照组增加,差异有显著性(P<0.05);流式细胞术检测显示,经50mg/L链球菌蛋白作用后,实验组Bel-7402细胞凋亡率明显高于对照组细胞(P<0.01)。③Bel-7402细胞凋亡相关蛋白的变化:Bel-7402细胞经50mg/L链球菌蛋白分别作用24,48,72h后,细胞色素C的释放逐渐增多,Procaspase-3及Bcl-2蛋白水平降低。结论:链球菌32080株蛋白对人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制作用存在着剂量和时间依赖性,并能将细胞的生长周期阻滞于G2/M期,诱导细胞凋亡,影响Bcl-2,procaspase-3和细胞色素C等重要的凋亡相关蛋白水平。
- 李彦芹郑群王艳李卫红朱俊平平国玲范东瀛张力平
- 关键词：链球菌细胞凋亡流式细胞术
- 链球菌蛋白对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫学活性的调节作用被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨链球菌蛋白对RAW264.7小鼠巨噬细胞免疫活性调节及其相关作用机制。方法:不同浓度的链球菌蛋白与RAW264.7小鼠巨噬细胞共同作用后,采用MTT法检测细胞的增殖活化;吞噬中性红试验观察巨噬细胞的吞噬功能;生物化学法检测巨噬细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量;RT-PCR法检测细胞中TNF-α、IL-6和Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)的mRNA表达情况;流式细胞术检测细胞表面TLR2和TLR4的表达强度。结果:链球菌蛋白对巨噬细胞的生长增殖和吞噬功能有较强的刺激作用(P<0.05),促进TNF-α和IL-6的表达和分泌(P<0.05),并可上调巨噬细胞表面模式识别受体TLR2和TLR4的表达(P<0.05)。结论:链球菌蛋白通过刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖,增强细胞吞噬活性以及诱导细胞因子的产生等发挥其免疫调节作用。
- 王艳李琴王一松陈辉郑群平国玲张力平
- 关键词：链球菌巨噬细胞细胞因子TOLL样受体
- 链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。
- 李彦芹王艳曹宁平国玲李卫红张力平
- 关键词：链球菌
- 链球菌蛋白诱导胶质母细胞瘤BT325细胞周期阻滞及凋亡的机制研究被引量：12
- 2014年
- 目的：探讨链球菌蛋白诱导人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞周期阻滞及凋亡的相关作用机制。方法体外培养人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性，倒置显微镜下观察细胞形态变化，原位染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞，流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率及线粒体膜电位（MMP），蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果链球菌蛋白（10～100 mg/L）可显著抑制细胞增殖，使细胞周期阻滞于G2/M期，呈时间和剂量依赖性；链球菌蛋白作用细胞24 h后，MMP显著下降（P＜0．01），凋亡细胞逐渐增多，48 h时各实验组凋亡率明显高于对照组（P＜0．01）；链球菌蛋白（50 mg/L）呈时间依赖性增强细胞P53蛋白表达，抑制B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达，促使细胞色素C（CytC）从线粒体进入胞质，从而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体（Procaspase-3）。结论链球菌蛋白可显著抑制人脑多形性胶质母细胞瘤BT325细胞增殖，影响细胞周期分布，通过线粒体途径诱导细胞发生凋亡，由此发挥其抗肿瘤活性作用。
- 王艳张力平陈辉曹宁朱俊萍平国玲李卫红
- 关键词：链球菌细胞周期线粒体膜电位
